化学方法建立的慢性肾功能衰竭模型

1.阿霉素诱导模型

(1)复制方法  体重250g左右成年大鼠，经腹腔按30mg/kg体重剂量注射戊巴bi妥钠麻醉，麻醉后大鼠仰卧固定于手术板上，腹部手术区常规消毒、去毛，沿右腹旁切口切开皮肤，暴露右侧肾脏，结扎肾蒂后，切除右肾，常规手术缝合切口，关闭腹腔。15d后，按5mg/kg体重的剂量经大鼠尾静脉注射阿霉素(adriamycin, ADR)，12周后即可复制出

CRF模型；如长期造模则需要观察28～48周。造模前后将模型大鼠置于代谢笼收集24h尿液，测定24h尿液量及尿蛋白量；按实验预定时间取静脉血样作血生化指标测定；动物麻醉后放血处死，取动物左肾组织标本，置固定液固定，石蜡包埋，作常规组织切片，HE染色，镜下观察。

(2)模型特点  注射ADR后4～8周模型动物即可出现尿量增加，活动减少，体重增加趋缓。注射后6～14d模型大鼠可出现蛋白尿，至4周左右蛋白尿为高，蛋白尿常可持续6～9个月，并伴有低蛋白血症、高脂血症、浮肿、胸腔及腹腔积液；动物收缩压(SBP)升高，菊粉廓清率(Cin)降低。镜下病理组织学观察显示，造模初期模型动物肾小球明显肥大，有早期的肾小管上皮损伤及肾小球硬化病理改变；造模后期肾小球硬化程度更严重，局灶性肾小球硬化病变范围明显扩大，更加广泛。本模型的急性期(注射ADR后3～6周)类似于人类微小病变型肾丨病，即以肾小管上皮细胞损伤为主。慢性期(给药后6～9个月)则类似于人类局灶性节段性肾小球硬化。

(3)比较医学  阿霉素是临床上常用的一种蒽环类抗肿瘤药，它能对肾小球和肾小管上皮产生直接毒性作用，使肾近曲小管上皮细胞胞膜屏障和吸收功能受损，细胞核崩解；脱落的小管上皮细胞与管腔内的蛋白质及其他细胞成分构成管型，堵塞管腔，导致肾小管内压升高，加重肾脏损伤，终形成CRF。采用ADR制备CRF模型，方法多样，既有单纯静脉注射给药法，也有注射加肾切除手术造模，且切除方式也可选择。因此不同模型的疾病特点并不一致。本模型对于扩张肾小管、降低肾小管压力、改善蛋白尿等方面的药物疗效观察及药物筛选具有较好的实用价值。

2.腺嘌呤诱导模型

(1)复制方法  体重为300g左右成年大鼠，用含0.5％～0.75％腺嘌呤(adenine)的酪蛋白饲料喂养；或用腺嘌呤制备成混悬液，按每天200mg/kg体重的剂量定时给大鼠灌胃。模型动物自由饮水与进食，造模过程需3～4周，即可复制出与人类GRF相类似的代谢紊乱、电解质异常、内分泌异常及贫血的慢性CRF模型。按实验预定时间分别采血作血液生化测定，并取肾脏组织标本，经固定液固定后，作常规组织切片，置光镜下检查。

(2)模型特点  模型动物于给药第12～15日，即出现多尿、多饮，精神萎靡，活动减少，进食量少，体重减轻，耳郭苍白，目色淡红，眯眼及眼睑浮肿，尾巴湿冷，体毛干枯、疏松。动物血肌酐、血尿素氮、中分子物质明显升高，红细胞、血红蛋白、红细胞压积、血小板均下降，电解质代谢紊乱(高磷、高钾、低钙、低钠等)，氨基酸代谢紊乱(必需氨基酸降低)及贫血。肉眼观察肾脏体积明显增大，镜下组织病理观察，肾组织内多数肾小管已破坏，小管上皮细胞水肿、坏死，管腔内及间质可见大量针状或长方形嘌呤代谢物结晶沉积；间质内有淋巴细胞浸润，并可见局部纤维组织增生。肾小管破坏是本模型的主要特征。

(3)比较医学  迄今为止，腺嘌呤诱发大鼠慢性肾功能衰竭的机制尚未阐明，可能是高浓度的腺嘌呤通过黄嘌呤氧化酶的作用变为极难溶于水的2,8-二羟基嘌呤，其沉积于肾小管后发生阻塞，抑制了机体氮质化合物的排泄，造成机体出现氮质血症、毒素蓄积和电解质、氨基酸代谢紊乱，引起动物出现病理特征类似于人类微小病变性肾丨病的CRF模型。本模型制作方法简单，造模周期短，且随着腺嘌呤饲料喂养时间的长短可分别制备轻、中、重度的CRF模型。用腺嘌呤给动物腹腔注射也可复制CRF模型，但在腺嘌呤剂量及造模时间等方面与腺嘌呤灌胃造模方法有差异。本模型适用于CRF时可恢复肾小管功能药物疗效的观察与评价。

3.氯化镉诱导模型

(1)复制方法  雄性KM小鼠，体重为20g左右。以含氯化镉1g/kg体重饲料的混合饲料(每千克饲料中含蛋白63.1g，脂肪52.5g，糖270.2g)喂养。将药粉加入饲料中制成混合饲料，所用药量均按每日摄入致死量的5％，每只小鼠按每天进食3g饲料来估算。全部小鼠均自由进食、进水，45d后换成普通饲料，共观察125d。按实验预定时间分别采血作血液生化测定，并取肾脏组织标本，经固定液固定后，作常规组织切片，置光镜下检查。

(2)模型特点  用药后15d，模型动物血尿素氮、血肌酐浓度显著升高；光镜下观察肾近曲小管上皮细胞变性，肾间质可见单核细胞炎性浸润，肾小球有核细胞数增多；用药后125d，肾小管病变消失，肾小球肥大，有核细胞数明显增多，部分肾小球发生纤维化；肾间质仍有单核细胞炎性浸润。本模型耗费低廉，制作方法简单，干扰因素少，与临床上中毒性肾丨病所致的CRF极其相似。

(3)比较医学  生活中长期接触低浓度镉对人类的肾小管有毒性作用，可造成以肾小管损伤为主要病理特征的 CRF。用含氯化镉饲料混合喂养小鼠建立的CRF模型，模型动物的肾功能和肾组织损害明显，并呈进行性加重特征，与临床上因镉中毒而导致的CRF相似。慢性镉中毒时，其对机体肾小管上皮细胞的损伤是直接作用为主，脱离接触后可恢复；而镉对肾小球、肾间质的损伤则有继发因素的参与，当损伤达到程度时，即使脱离接触，继发因素仍可持续存在，使肾小球和肾间质病变进行性加重，终形成CRF。本模型可用于临床上镉中毒引起的CRF药物治疗、筛选方面的研究。

4.消痔灵诱导模型

(1)复制方法  体重为200g左右、经检查尿蛋白为阴性的雄性大鼠，经腹腔按30mg/kg体重的剂量注射戊巴bi妥钠，麻醉后大鼠仰卧固定于手术板上，腹部注射区常规消毒，用“肾脏定位器”固定肾脏，用0.6ml精制消痔灵加等量生理盐水配制成1.2ml消痔灵注射液，分别从腹部两侧经皮一次性直接注入两侧肾脏。注射时，从下极进针(4号针头)至中极偏上处，尽量偏向皮质部，针尖针面朝向皮质，缓慢注射(每次注射至少1min)，出针后用碘酊棉球压迫针眼3min以上。造模前后分别测模型大鼠尿蛋白、尿素氮、肌酐，同时动物麻醉后放血处死，取动物左肾组织标本，置固定液固定，石蜡包埋，作常规组织切片，HE染色，光镜下观察。并取肾脏组织作电镜标本，透射电镜下观察。

(2)模型特点  模型动物注射后3d内饮食减少，体重减轻，1周后体重回升，但体重增长趋缓；造模期间模型大鼠体毛疏松，有脱毛现象。动物解剖后肉眼观察可见肾脏wei缩呈黄褐色，质地较硬，表面凹凸不平，有弥漫性黄褐色斑点及斑块。镜下病理组织学观察显示，造模后2～4周内，模型动物肾组织可见凝固性坏死灶，残存肾小球代偿肥大，肾小管增生扩张，小管上皮细胞肿胀、变性、坏死、脱落，管腔中可见蛋白管型。造模后6周起，系膜细胞及基质有轻度至中度增殖，部分残存肾小球可见局灶性玻璃样变性，部分间质和肾小球纤维化；至8周时，肾小球明显纤维化；至16周时，全肾小球发生纤维化，肾间质也出现明显纤维化。电镜下超微结构观察显示，造模后8周时，可见内皮及上皮细胞空泡形成，足突融合消失，基底膜增厚、疏松，基底膜基质足突之间可见胶原纤维，肾小管上皮细胞肿胀，微绒毛变短，排列紊乱，管腔闭塞，内有蛋白管型；粗面内质网扩张、增多，溶酶体增多。至16周时，超微结构病理改变进一步加重，肾小球纤维化，肾小囊消失，毛细血管基底膜增厚及皱缩，可见电子致密物沉积。晚期：代谢紊乱，肾小球和肾小管功能严重受损，光镜和电镜均显示与人类CRF固缩肾的病理改变有高度一致性。

(3)比较医学  消痔灵主要由中药五倍子和明矾等有效成分组成。五倍子的主要成分鞣酸对机体组织有较强的收敛性，能使蛋白凝固，血管收缩。明矾的主要成分硫酸钾铝则对机体局部有较强的致炎作用，并可使组织纤维化。消痔灵制剂可引起机体发生血管炎、动静脉血栓形成及增生性动脉内膜炎，并可促进血管腔狭窄，减少或阻断局部血流。采用适量的消痔灵注入大鼠肾脏的方法，可使大部分肾单位破坏，终导致大鼠出现CRF的病理表现。本模型制作方法简便易行，创伤小且无感染，模型稳定可靠，成功率高，可严格控制剂量来制作轻、中、重不同病变程度的CRF模型，模型特点与l临床上人类CRF固缩肾相似，适用于同类疾病药物治疗及筛选方面的研究。

5.柔红霉素诱导模型

(1)复制方法  经检查尿蛋白为阴性，体重200g左右成年大鼠，经其尾静脉按10mg/kg体重的剂量注射柔红霉素，注射后动物常规饲养观察，自由饮水和进食。需4～6周即可复制出CRF模型。模型制备观察过程中，分别采集尿液、血液作指标测定，并于实验预定时间麻醉处死动物，取肾脏组织标本，置放于固定液中，作常规组织切片，HE染色，光镜下观察。同时取肾组织作电镜标本，透射电镜下观察。

(2)模型特点  注射柔红霉素后1～3周，模型动物即可出现大量蛋白尿(大于300mg/24h)，并维持在较高水平，同时常伴有高脂血症、低蛋白血症及全身浮肿。光镜下病理组织学观察模型大鼠肾组织内肾小球轻度肿胀，少量血管襻毛细血管腔轻度变窄，肾小管病变轻微，其腔内有许多管型，肾间质内血管无明显病理改变。电镜超微结构观察大多数肾小球脏层上皮细胞足突融合或扁平化。

(3)比较医学  本模型制作原理与ADR造模类似。柔红霉素在肾脏内某一部位可被代谢还原为半醌型自由基，自由基和氧反应产生活性氧，这些物质可引起肾小球上皮细胞脂质过氧化反应，改变肾小球上皮细胞糖蛋白代谢，破坏肾小球滤过膜的结构和功能，终造成膜滤过屏障的选择性变化而引发蛋白尿，使模型动物发生CRF。本模型与腺嘌呤方法建立的CRF模型相比，模型动物尿蛋白程度更重，持续时间也更长，其应用与阿霉素CRF模型相同。