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蛋白实验蛋白质双向电泳实验注意事项

发布时间:2021-03-25      点击次数:206
  蛋白实验双向电泳技术是等电聚焦和十二烷基硫酸铵-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的组合,即先进行等电聚焦电泳(按照蛋白质等电点对蛋白质进行分离),然后再进行SDS-PAGE凝胶电泳(按照蛋白质相对分子量大小对蛋白质进行分离),最后经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。
  等电位聚焦是一种根据分子携带的电荷不同来分离分子的技术。蛋白质同时具有酸性基团和碱性基团,在ph值低于等电点时会带有正电荷,在电场中向阴极移动。将蛋白质置于有递增ph梯度的凝胶中电泳,蛋白质所带电荷会一直减少,直到蛋白质移动到ph值与其等电点相同的区域。在此处,蛋白质静电荷为0,因此停止运动,最终蛋白质被“聚焦”在ph值和其等电点相同的窄带中。
  蛋白实验蛋白质双向电泳实验注意事项:
  1.TCA:TCA有毒性,有刺激性气味,损害呼吸道、眼睛及皮肤,称量时应戴手套及口罩,避免沾到皮肤及吸入,若不慎接触,应立即用大量水冲洗后就医。TCA易潮解,称量时应迅速。
  2.PMSF:PMSF有毒,严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,称量时应戴手套及口罩,避免沾到皮肤及吸入,若不慎接触,应立即用大量水冲洗后就医。PMSF溶于异丙醇后置于-20℃长期保存,保存中易析出结晶,用前取出待结晶溶化后再使用
  3.甲醛:有刺激性气味,易挥发,其蒸汽强烈刺激粘膜、眼睛,具有致癌性。使用时应戴手套及口罩,在通风橱内操作。
  4.甲醇:有毒,能引起失明。DTT:很强的还原性,散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收危害健康。当使用固体或高浓度储存液时,戴手套和护目镜,在通风橱中操作。beta-巯基乙醇:可致命,对呼吸道、皮肤和眼睛有伤害。丙酮:对神经系统有麻醉作用,并对黏膜有刺激作用。
 
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