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胎鼠皮层神经元的原代培养

发布时间:2021-11-16      点击次数:212

一、背景
大脑皮层是调节躯体运动的高级
中枢。它由初级感觉区、初级运动区和联合区三部分构成。人类大脑皮层的神经细胞约有140亿个,面积约2200平方厘米,主要含有锥体形细胞、梭形细胞和星形细胞(颗粒细胞)及神经纤维。

体外原代培养神经元作为神经科学研究的有力手段,越来越受到广大科研工作者的重视。由于神经元是一种高度分化的细胞,动物出生后很少分裂,相对于其它细胞而言,神经元在体外更难以存活和生长。因此,体外培养神经元要求的培养方法和营养条件均较为特殊。

二、实验步骤
1. 无菌条件下,从怀孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入预冷的无钙、镁平衡盐溶液中;
2.在解剖显微镜下,分离取出胚胎大脑皮层,除去脑膜,剪碎组织(1mm3),加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱内消化10 分钟,期间摇晃一次;
3.去掉上清,加入终止液终止消化,吹打10-15次,不能有气泡,收集上清;剩余沉淀加入终止液继续吹打5-10次;
4.所收集的上清过滤后,将细胞悬液于4℃1000rpm离心10min ,弃上清,管内加入新鲜培养液重悬;
5.台盼蓝染色计数,以 3 x 104cells/孔种入包被的24孔板,37℃,5%CO2,95%饱和湿度的培养箱中培养;
6.每周换液两次,每次半量换液。

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