咨询热线

18017847121

当前位置:首页  >  技术文章  >  初代细胞培养实验

初代细胞培养实验

发布时间:2022-02-18      点击次数:249

初代培养或原代培养,是从供体获取组织后的培养。组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大的变化,具有二倍体遗传性状,在供体来源充分、生物条件稳定的情况下(年龄、性别),在一定程度上能  映体内状态。

 实验方法原理

 消化培养法

 合成培养基胰蛋白酶消化培养法,能把组织块分散成细胞团或单个细胞,便于细胞从培养液中摄取营养和排出代谢产物,细胞能较快地长成单层。
  本法尤适用于培养大量组织,细胞产量高;但用于经常性小量培养工作稍显繁琐,无菌操作不良时且易污染。

  实验材料

  组织

  试剂、试剂盒

  Hanks  培养液 胰蛋白酶

 仪器、耗材

  吸管 平皿  培养瓶 烧杯 搅拌器 三角烧杯 眼科剪 眼科镊 计数板

  实验步骤

  1.  准备
  取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20 分钟;
  2.  布局
  点燃酒精灯(或煤气灯),安装吸管帽(应通过火焰);

  3.  处理组织
   把组织块置入烧杯中,用Hanks液漂洗2~3 次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60 分钟;
  4.  剪切
  用眼科剪把组织块切成2~3 毫米大小的块(用手术刀割亦可),以便于消化;加入比组织块总量多30~50 倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞;
  5.  消化
  或用恒温水浴,或置入37 ℃温箱消化均可,消化中每隔20 分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好(消化前瓶中需置一无菌搅棒);消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定;
  6.  分离
  在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块(必要时可继续进行消化);低速  (500~1000 转/分)离心消化液5 分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液(如有其它酶或EDTA 等消化,需用Hanks液洗脱一两次后,再加入培养液);
  7.  计数
  用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中;对大多数细胞来说,pH 要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说胆液体变酸,可用NaHCO3调整;


  8.  培养
  置入36.5 ℃温箱培养;如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽(松口)堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需更换新塞。

 


上海达为科生物科技有限公司
  • 联系人:张
  • 地址:上海市长江南路180号长江软件园B区B637室
  • 邮箱:zhangyan@jrdbio.com
  • 传真:021-55130728
关注我们

欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息

扫一扫
关注我们
版权所有©2022上海达为科生物科技有限公司All Rights Reserved    备案号:沪ICP备15041491号-2    sitemap.xml    总流量:44010
管理登陆    技术支持:化工仪器网