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吉姆萨染色实验

发布时间:2022-04-23      点击次数:151

吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好,结构显示更清晰,而胞质和中性颗粒则着色较差。


基本方案


实验材料 


原位杂交玻片


试剂、试剂盒


吉姆萨染色液磷酸钠缓冲液乙醇二甲苯


仪器、耗材


染色盘培养箱滤纸


实验步骤


1.  将显影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盘中。

 

11个盘:pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液,所配的25倍稀释的吉姆萨染液。

 

23个盘:水。

 

3)脱水系列溶液:

 

3个盘:分别盛50%70%95%乙醇。

 

2个盘:盛有100%乙醇。

 

3个盘:盛有二甲苯。

 

3.  25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s(依染色时间决定染色的强弱),将玻片在水中浸泡3次,每次2 min

 

4.  连续用乙醇脱水系列溶液处理,每盘中浸泡2 min,将玻片移至二甲苯盘中,毎次浸泡2 min,共3次。


5.  在通风橱中,按如下操作压片固定:用一平头镊(拿在左手),从二甲苯中取出一块玻片,夹住磨面端置水平。加4Permount 的于另一端(切片所处位置),左手拿一干净的盖玻片,很缓慢地放在载玻片上(在加压片固定介质和盖玻片前,勿使玻片变干,因微小气泡会造成人为假象)。

 

6.  3MM 滤纸,沿盖玻片边缘,小心吸去多余固片介质/二甲苯,并擦拭载玻片背面(勿擦拭盖玻片)。

 

7.  将玻片平放于一硬纸盒盘上,置42℃温孵箱2天使之凝固。

 

8.  以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳,染料及固片介质。用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。放入玻片盒,必要时,载玻片上再注明标签。

 

9.  显微镜观察玻片,观察时可依信号强弱,调节光亮。


注意事项


1.  勿将玻片直立存放于玻片中,因此时固片介质尚未凝结。

来源:丁香通


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