咨询热线

18017847121

当前位置:首页  >  技术文章  >  激光共聚焦实验其具体的步骤是怎样的呢?

激光共聚焦实验其具体的步骤是怎样的呢?

更新时间:2024-06-25      点击次数:39
  激光共聚焦实验是一种高分辨率的光学显微技术,广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。其原理是利用激光束扫描样本,并通过光学系统将样本的荧光信号收集到探测器中。首先,一个激光束通过一个镜面反射器被聚焦在样品上的一个点上。激光束的波长通常在可见光范围内,例如绿光或红光。聚焦点的大小取决于激光束的直径和聚焦镜头的数值孔径,较小的聚焦点意味着更高的分辨率。当激光束聚焦在样品上时,该点处的荧光染料或标记物会被激发,并发射出荧光信号。由于激光束只聚焦在一个点上,只有该点处的荧光信号会被收集到探测器中。接下来,激光束通过一个扫描和反射系统来移动到样品的下一个位置,以便扫描整个样品。这个系统通常由镜子和透镜组成,可以引导激光束按照预定的路径扫描样品。
  激光共聚焦实验具体的步骤:
  1、样品制备
  细胞培养和处理:首先将培养好的细胞用PBS缓冲液洗涤两次,去除培养基中的杂质。加入适量的荧光染料进行标记,与细胞孵育一定时间,使染料能充分进入细胞并标记目标分子。
  固定和透膜处理:用4%多聚甲醛固定细胞,然后用0.1%Triton-X 100进行透膜处理,以便于染料和抗体的渗透。
  封闭和染色:使用5%PBS脱脂乳进行封闭处理,随后加入一抗和二抗,分别孵育1小时,并进行多次PBS清洗去除多余的染料和抗体。最后,用DAPI对细胞核进行染色。
  2、显微镜设置
  启动显微镜和激光器:打开激光共聚焦显微镜的电源,启动激光器和计算机。在操作软件中选择适当的荧光样品激发波长,并调整相应的滤光片组块。
  焦距和扫描设置:在目视模式下调整物镜放大倍数,找到需要检测的细胞。切换到扫描模式,调整双孔针和激光强度参数,以获得清晰的共聚焦图像。
  3、数据采集
  图像获取:选择合适的图像分辨率,将样品完整扫描后保存图像结果。如果需要三维图像,则选用“Z-Stack”模式,确定光学切片的位置及层数,获得一系列光学切片图像。
  时间序列图像:如果需要进行时间序列成像,设定所需的时间间隔和所需图像数量,开启“Time-Series”功能键,自动在规定的时间内按照设定的时间间隔获取图像。
  4、数据分析
  图像处理:使用图像处理软件对采集到的图像进行处理和分析,如亮度、对比度调整,以及测量目标分子的荧光强度等。
  结果导出:将处理后的图像和数据导出,用于后续的实验分析和报告撰写。
上海达为科生物科技有限公司
  • 联系人:张
  • 地址:上海市长江南路180号长江软件园B区B637室
  • 邮箱:2844970554@qq.com
  • 传真:
关注我们

欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息

扫一扫
关注我们
版权所有©2024上海达为科生物科技有限公司All Rights Reserved    备案号:沪ICP备15041491号-2    sitemap.xml    总流量:103831
管理登陆    技术支持:化工仪器网