甲基化检测的主要方法如下

　　甲基化检测是一种用于分析和检测DNA甲基化状态的技术手段，它在生物学和医学研究中具有广泛的应用。DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一，它发生在DNA分子的胞嘧啶碱基上，通过添加甲基基团来调控基因的表达。甲基化通常发生在CpG二核苷酸的胞嘧啶5’碳位，形成5’-甲基胞嘧啶。这种修饰方式可以在不改变DNA序列的前提下，实现对基因表达的调控。甲基化检测就是通过各种技术手段来检测和分析DNA分子上的甲基化状态。

　　甲基化检测的主要方法：

　　1、甲基化特异性的PCR

　　原理：用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，使所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。随后设计针对甲基化和非甲基化序列的特异性引物进行PCR扩增。

　　检测：通过电泳检测PCR扩增产物，如果能用针对处理后甲基化DNA链的引物得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，则说明被检测的位点不存在甲基化。

　　2、亚硫酸氢盐测序法

　　原理：同样使用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，甲基化的胞嘧啶保持不变。随后进行PCR扩增，在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。最后对PCR产物进行测序，以判断CpG位点是否发生甲基化。

　　方法：分为BSP-直接测序法和BSP-克隆测序法。后者将PCR产物克隆至载体后进行测序，以提高测序成功率。

　　3、高分辨率熔解曲线法

　　原理：在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物，这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若CpG岛发生甲基化，则经亚硫酸氢盐处理和PCR扩增后，样品中的GC含量发生改变，从而导致熔解温度的变化。

　　检测：通过监测熔解温度的变化来判断CpG位点的甲基化状态。