分离提取E15天胎鼠脊髓神经元的原代细胞培训

我司已成功分离并培养E15天胎鼠脊髓神经元的原代细胞培养，并对细胞平台的人员进行培训。

培训地点：会议室、细胞房

参与培训人员：细胞房技术人员

首先在会议室先讲解以下基础操作步骤

(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。

(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分钟振荡一次；

(4)去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余组织再消化一次。

(5)4℃1000rpm离心10min，弃上清，加入种植液1重悬，培养箱内差速贴壁30min；

(6)收集上清，台盼蓝染色计数，按6*105cells/孔种入六孔板（种植液1），37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养；

(7)培养第二天，全换液更换为种植液2；

(8)培养第四天，半量换液加入5uM的阿糖胞苷，24h全量换液；

(9)之后每周换液两次。

之后并在细胞房代领细胞平台所有技术人员进行实练操作。后续并将组织细胞平台的每位技术人员将此技术熟练操作。