本次会议,主要针对人外周血内皮祖细胞分离培养,就以下内容展开了交流:
1.血液样本的准备:首先从健康供者或患者身上通过外周静脉抽取血液样本,并使用抗凝剂处理。
2.单核细胞的分离:通过密度梯度离心法,如使用Ficoll-Paque等介质,将血液样本中的单核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs)分离出来。
3.细胞的培养:将分离出的PBMCs以适当的细胞密度接种到预先涂覆有细胞粘附因子(如纤维连接蛋白)的培养容器中,并使用专门的内皮细胞培养基进行培养。培养条件通常包括适宜的温度(37°C)、5% CO2的气体环境和一定的湿度。
4.细胞的诱导分化:为了促进EPCs的生长和分化,通常会向培养基中添加多种生长因子和细胞因子,如血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子(IGF)等。
5.细胞的鉴定:EPCs的鉴定通常基于细胞表面标志物的表达,如CD31、CD34、CD133、KDR(血管内皮生长因子受体-2)和vWF(血管假性血友病因子)。流式细胞术和免疫荧光染色是常用的鉴定方法。
6.细胞的扩增和功能验证:通过传代培养,可以扩增获得足够数量的EPCs。此外,还可以通过体外毛细血管形成实验等功能性实验来验证EPCs的功能。
本次会议,提升公司对人外周血内皮祖细胞分离培养的重要知识点的认知。