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脾单核细胞分离实验

简要描述:脾单核细胞分离实验是达为科生物细胞平台的基础服务项目之一,由专业的实验技术人员操作完成。

  • 更新时间:2021-11-12
  • 浏览次数:210

详细介绍

脾单核细胞分离实验操作方法:

采用颈椎脱臼法处死小鼠,于75%的酒精中浸泡10-15min;
在无菌超净台内分离脾脏,放入PBS溶液(按照1:50的比例加入双抗)中清洗2遍;
将清洗后的脾脏组织转移至离心管中,加入适量的RMPI-1640培养基,用剪刀将其剪碎成糜状;
将剪碎后的组织经200目的滤网过滤,得到脾细胞悬液;
另取一个离心管,先加入与细胞悬液等量体积的淋巴细胞分离液,之后将细胞悬液轻轻加到离心管的淋巴细胞分离液上层(注意45度倾斜沿管壁滴加,一定要缓慢否则悬液沉下去导致分层界面不明显);
3000rpm离心10min,离心完毕后吸取中间白膜层即为脾单个核细胞;
3000rpm离心10min,加入RMPI-1640培养基进行洗涤一次;
用红细胞裂解液去除红细胞;3000rpm离心10min,再次用RMPI-1640培养基进行洗涤一次;
洗涤结束后,所得细胞沉淀用RMPI-1640培养基重悬后进行细胞计数。

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