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原代细胞分离纯化

简要描述:原代细胞来源于胚胎、组织器官及外周血,是经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞。原代细胞分离纯化是细胞培养工作的基础。

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍

单个细胞分离培养技术(细胞克隆技术),即从细胞群体中分离出一个细胞,并使其在体外培养体系中能繁殖成新的细胞群体,这种由单个细胞所形成的细胞群(或集落)称为一个克隆,这种纯化后的细胞群体称为细胞株。有以下5种常采用的方法:毛细管克隆法、有限稀释克隆法、平皿克隆分离法、软琼脂克隆分离法、单细胞显微克隆法。

细胞的纯化

细胞的纯化分为自然纯化和人工纯化,主要采用以下5种方法:

1.细胞因子依赖纯化法:加入某些特殊的细胞因子从而使细胞达到纯化,但是此方法有依赖性,加入之后每次培养细胞都需要因子培养。

2.酶消化法:利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,达到纯化的目的。此方法也可对贴壁细胞与半贴壁及粘附细胞间的分离纯化。

(1)上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化

需要在胰蛋白酶的作用下,让成纤维细胞先脱壁,从而得到上皮细胞。

(2)骨髓基质肌样细胞的纯化

同样适用酶消化法使粘附细胞脱壁分离,让骨髓基质细胞或血液中肌样细胞与淋巴细胞分开和纯化。

3.反复贴壁法

成纤维细胞其贴壁过程快,能在短时间内完成附着过程,而上皮细胞在短时间内不能附着或附着不稳定,稍加振荡即浮起,利用此差别可以纯化细胞。

4.电烙筛选法

贴壁细胞在转化时,细胞层中会出现分散的转化灶,细胞密集、排列规则,有明显生长趋势,与周边未能转化的细胞有明显的区域界限,可用机械刮除法去除或用电烙筛选法烫死未转化细胞而保留转化灶细胞。

5.机械刮除法

此方法去除不需要的细胞区域而保留需要的细胞区域,适用于上皮细胞和成纤维细胞分离纯化。

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