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甲基化检测MSP

简要描述:甲基化检测MSP:DNA经亚硫酸氢钠处理后,所有未甲基化的胞腔啶发生脱氨基变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变,基于这种碱基的改变,然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,然后通过琼脂糖凝胶电泳分析,确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍

甲基化检测原理:

甲基化特异性的PCR是种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。重亚硫酸盐处理DNA后,基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。随后进行引物特异性的PCR。该方法引物设计是关键。MSP中设计两对引物,即一对结合处理后的甲基化DNA链(引物对M),另一对结合处理后的非甲基化DNA链(引物对U)。检测MSP增产物,如果用引物M能扩增出片段,则说明检测位点存在甲基化;若用引物U扩增出片段,则说明被检测的位点不存在甲基化。

MSP:原理是基于DNA经亚硫酸氢钠处理后,所有未甲基化的胞腔啶发生脱氨基变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。基于这种碱基的改变,然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,然后通过琼脂糖凝胶电泳分析,确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。

甲基化检测优点:检测灵敏度高,样品消耗少,仅需1μg的基因组DNA,可用于石蜡包埋样本;快速、简单,省时。

服务流程:
1.根据目的基因启动子序列设计相应的引物;

2.基因组DNA的提取和定量;

3.亚疏酸氢钠修饰基因组DNA;

4.修饰后DNA纯化回收;

5.a.结合实时定量PCR的qMSP;
  b.BSP,对PCR产物进行测序并与未经处理的序列比较;

6.数据处理:向客户提供数据分析结果与实验报告。

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