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侵袭/迁移实验

简要描述:细胞侵袭/迁移实验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍

操作步骤
(1)所有细胞培养试剂和Transwell chamber 放在37°C温育;
(2)待测细胞培养至对数生长期,消化细胞,用PBS和无血清培养基先后洗涤一次,用无血清培养基悬浮细胞,计数,调整浓度为2X10* /ml;
(3)在下室(即24孔板底部)加入600-800μ 1含10%血清的培养基,上室加入100- 150μ 1细胞悬液,继续在孵箱培养24小时;
(4)用镊子小心取出chamber,吸干上室液体,移到预先加入约800μ 1甲醇的孔中,室温固定30分钟;
(5)取出chamber, 吸千上室固定液,移到预先加入约800μ 1 Giemsa 染液的.孔中,室温染色15-30分钟;
(6)轻轻用清水冲洗浸泡数次,取出chamber, 吸去上室液体,用湿棉棒小心擦去_上室底部膜表面上的细胞;
(7)用小镊子小心揭下膜,底面朝上晾干,移至载玻片上用中性树胶封片;
(8)显微镜下取9个随机视野计数,统计结果。

 

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