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小鼠脾脏单细胞分离

简要描述:小鼠脾脏单细胞分离:单细胞分离法是一种从待分离的材料中直接分离单个细胞进行培养获得纯培养的方法。

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍


1 物理方法
又称机械法,分为3种:(1)研磨法,即通过简单研磨后过滤去除杂质。本法一般针对脆性较大的组织,虽简单易行,但对细胞损伤较大,且经过滤获得的细胞纯度不高;(2)振荡法,即通过振荡后过滤获得细胞悬液,一般针对细胞间联接不是非常紧密的组织;(3)直接分离法:本法所得细胞产量较高,形态完整,分散度好,杂质少,但活性与功能较差,且随着培养时间的延长,活性及功能逐渐下降,不适于一些持续时间较长的实验研究。
2 化学方法
又称鳌合法,即利用一些特殊的化学试剂破坏细胞间的联接。Ca2+、Mg2+等在细胞间桥粒联接中起重要作用,鳌合剂(EDTA、EGTA、柠檬酸盐等)结合了这些离子后,可使桥粒联接断开,有利于细胞分离。本法单独使用效果较差,常与酶消化法结合使用。
3 生物方法
使用普遍的是酶消化法,即利用特定的酶溶液溶解、破坏细胞间蛋白联接,是目前分离获取游离组织细胞常用的方法。根据不同细胞不同的蛋白联接应选用不同的酶种类。胶原蛋白在高等动物机体中含量丰富,是动物和人体皮肤、血管.骨胳等组织的主要基质,故常用的是胶原酶法。胶原蛋白有很多种类型,其对应的酶也各不相同。位于基底膜的第IV型胶原蛋白是维持细胞养分和其他正常代谢的重要关键,故破坏此蛋白一般即可达到分离的目的。

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