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蛋白纯化实验

简要描述:蛋白纯化实验要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍

(1) 根据分子大小不同的分离方法:透析和超过滤(利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质);密度梯度离心(蛋白质在介质中离心时质量和密度较大的颗粒沉降较快);凝胶过滤(一种柱层析)
(2) 利用溶解度差别分离:等电点沉淀法(由于蛋白质分子在等电点时净电荷为零,减少了分子间静电斥力,因而容易聚集沉淀,此时溶解度小);盐溶与盐析(利用一定浓度盐溶液增大或减小蛋白质的溶解度)
(3) 根据电荷不同的分离方法,主要包括电泳和离子交换层析分离;
(4) 蛋白质的选择吸附分离(利用颗粒吸附力的强弱不同达到分离目的)
(5) 根据配体特性的分离——亲和层析(利用蛋白质分子与另一种称为配体的分子能够特异而非共价地结合这一生物性质)
(6) 低温有机溶剂沉淀法: 用与水可混溶的有机溶剂,甲醇,乙醇或丙酮,可使多数蛋白质溶解度降低并析出,此法分辨力比盐析高,但蛋白质较易变性,应在低温下进行。
 

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