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子宫内膜异位症模型

简要描述:上海达为科致力于临床前药效学CRO实验,多年的药效学子宫内膜异位症模型的构建,为广大药效学实验提供保障。可开展大小鼠药效学子宫内膜异位症模型的构建。

  • 更新时间:2022-12-29
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详细介绍

子宫内膜异位症模型实验介绍:

常用动物:大鼠,小鼠,性成熟,8-10周龄

适应性饲养后,用消毒棉拭子旋转插入小鼠阴道内,并在阴道内轻轻转动几下后取出,涂于载玻片上,用95%酒精固定30min后晾干。涂片进行HE染色或瑞士染色,观察动情周期。连续观察2周,每日定时进行阴道涂片检查,观察动情周期。选择连续有2个或2个以上正常动情周期(阴道涂片为大量无核角化细胞的大鼠),造模前一天每鼠肌注雌二醇0.1mg/(kg.d,大鼠),使动物统一处于动情期。

建模方法I:

大鼠:腹腔注射麻醉后,将大鼠固定,腹部剪毛,消毒,并在无菌条件下开腹。在尿道口上约1cm处做垂直正中纵切口长约2-3cm进腹。大鼠子宫呈Y型,分离左侧子宫,近端离左子宫角1cm处结扎,远端离卵巢2cm处结扎,并结扎两端间的子宫系膜血管,切除长约1.5-2.0cm的子宫段,立即放入盛有生理盐水的培养皿中,修剪去子宫浆膜外的脂肪组织,纵向切开子宫腔,剥去浆膜层及肌层,将子宫内膜片剪成5mm×5mm大小,移植到腹壁血管丰富处,注意其内膜面与皮下组织贴合。逐层缝合伤口,待老鼠自然苏醒后常规饲养。术后每天注射,共3天。

建模4周后,开腹检查所有造模大鼠移植的子宫内膜是否生长。若见移植物体积增大,形成表面被覆结缔组织并有血管形成、内有液体积聚的透明小囊泡,则证明造模成功。

建模方法II:

小鼠:动情期C57BL/6小鼠,脱颈椎法处死,仰卧位固定,腹部酒精消毒后,铺上无菌治疗洞巾,戴无菌手套,在耻骨联合上方0.5cm处,沿正中线剖开腹腔。找到Y形子宫,小心分别牵出左、右侧子宫,细心分离双侧子宫系膜。离断宫角与卵巢,在Y形子宫分叉分别剪断左侧及右侧子宫,放入装有10mL37℃生理盐水的无菌弯盘中,反复漂洗子宫表面的血迹,进一步分离剩余粘附的子宫系膜。将两个子宫角分别放置于两个无菌弯盘中,将它们直接剪成大小约1mm3的大小均等的碎片,并将它们悬浮于37℃生理盐水中。将捐赠鼠的子宫按1:2的比例接种于受鼠腹腔,用0.3mL生理盐水悬浮弯盘里的组织碎片。

随机取动情期C57BL/6小鼠,取脐下0.5cm偏正中线0.5cm处的左下腹为进针点,将溶有子宫组织碎片的0.3mL生理盐水用20号针头连同子宫组织快碎片注入接受鼠的腹腔,后放置于鼠笼。直至第9天。随机取动物,处死后,取异位内膜,进行冰冻切片制备,HE染色观察异位内膜病灶是否有典型的内膜腺体及间质,提示复制动物模型是否成功。


分子实验平台:高效运作了qRT-PCR、Western blot、双向电泳技术、分子克隆与质粒构建、流式细胞仪检测、免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝胶电泳迁移实验、酶联免疫吸附测定、外泌体抽提及鉴定等实验。


基因组学平台:可以完成甲基化检测、基因芯片分析、高通量测序等实验。


蛋白组学平台:能实现LC-MS、ITRAQ、蛋白质修饰分析等重点实验项目。


病理学平台:涉及免疫荧光染色、免疫组织化学染色、HE染色、特殊染色等实验。


临床前CRO服务:主要提供呼吸系统、神经系统、免疫系统性疾病的药效学评价服务,包括靶点验证、体内外模型的构建、药物筛选、药物分析、药效性评价、药代

动力学和药理学研究以及院内制剂研发等。


项目转化服务:助力客户进行方案设计、联合课题申报、药物项目引进和孵化,解决客户对实验技术平台、专业人和融资的需求。


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