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过敏性哮喘动物模型

简要描述:动物哮喘模型:是达为科生物较为成熟的动物模型之一,由动物平台经验丰富的实验员操作完成。

  • 更新时间:2022-12-30
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详细介绍

过敏性哮喘动物模型实验服务介绍:

BALB/c小鼠于第0天和第14天分别腹腔注射OVA液和DBP溶液,第21~23天连续3天以OVA溶液雾化激发,每天于上午下午固定时间雾化2次,每次20min。雾化过程中观察小鼠一般行为变化,后一次雾化结束后24小时,小鼠摘眼球取血,取支气管肺泡灌洗液及肺组织。

一般行为学观察  观察小鼠在雾化过程中是否出现挠脸、毛发竖立、呼吸急促、烦躁不安、大小便失禁等现象。

血中Eos计数    后一次雾化激发结束24h后,小鼠摘眼球取血,获得血液后立即取出20 μl与380μl 嗜酸性粒细胞稀释液混匀,利用细胞计数板于光学 显微镜下进行Eos计数。

血清中IgE测定   将获得的血液静置2h后,离心,3500 rpm,15min,取血清,按IgE ELISA试剂盒说明书进行测定,并通过样本总蛋白含量进行结果校正。

BALF细胞分类计数  将小鼠仰卧位固定,打开胸腔后,结扎右肺及左侧肺上叶。分离并暴露气管,用适宜针头进行插管,以预冷PBS反复灌洗肺组织(0.5 mL/次,共两次),收集BALF,低温离心( 3500 rpm,10min ),取上清,保存于-20℃待测。细胞沉淀用0.2 mL预冷PBS重悬,吹打均匀后取10 μl于细胞计数板上在光学显微镜下计细胞总数,剩余细胞悬液涂片,用快速瑞姬氏染液染色,显微镜下进行细胞分类计数。

BALF中IL-4、IL-5、IL-9、IL-13、IFN-γ的测定  将获得的BALF上清根据相关细胞因子检测试剂盒的说明书进行各指标定量检测,测定结果经总蛋白含量校正。

肺组织中IL-4和IFN-γ的测定  将右侧肺组织用预冷的PBS研磨得15 % 组织匀浆,低温离心,3500 rpm,15min,取上清按照 ELISA 测定试剂盒的操作步骤进行IL-4和IFN-γ测定,并通过样本总蛋白定量来进行校正。

肺组织HE及PAS染色  剪取左肺上叶,置10%中性福尔马林中固定,石蜡包埋,常规石蜡包埋,切片,HE及PAS染色,镜下观察肺组织炎性细胞浸润及黏性蛋白增生情况。


分子实验平台:高效运作了qRT-PCR、Western blot、双向电泳技术、分子克隆与质粒构建、流式细胞仪检测、免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝胶电泳迁移实验、酶联免疫吸附测定、外泌体抽提及鉴定等实验。

基因组学平台:可以完成甲基化检测、基因芯片分析、高通量测序等实验。

蛋白组学平台:能实现LC-MS、ITRAQ、蛋白质修饰分析等重点实验项目。

病理学平台:涉及免疫荧光染色、免疫组织化学染色、HE染色、特殊染色等实验。

临床前CRO服务:主要提供呼吸系统、神经系统、免疫系统性疾病的药效学评价服务,包括靶点验证、体内外模型的构建、药物筛选、药物分析、药效性评价、药代

动力学和药理学研究以及院内制剂研发等。

项目转化服务:助力客户进行方案设计、联合课题申报、药物项目引进和孵化,解决客户对实验技术平台、专业人和融资的需求。


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