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ROS染色

简要描述:活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)是在机体进行正常有氧代谢时产生的一类氧化性物质,它们由氧组成,具有高度的活性和活泼的性质。这些物质包括超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(OH-)、臭氧(O3)和单线态氧(1O2),由于它们携带不成对的电子,因此表现出强烈的化学反应活性。

  • 更新时间:2024-03-15
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详细介绍

ROS染色检测方法

目前有多种方法用于检测ROS,包括荧光染色法、电子顺磁共振技术(EPR)、化学发光法、色谱法、分光光度法、电化学生物传感器以及基于荧光蛋白等七种。在这里,我们将着重介绍荧光染色法,以及其在检测细胞内ROS时的原理和操作步骤。


ROS染色检测原理

目前,用于检测细胞内ROS广泛采用的方法是DCFH-DA荧光探针法。DCFH-DA(二氯荧光黄双乙酸盐)是一种可指示的探针,其本身不具有荧光,但可以自由穿过细胞膜。一旦进入细胞,它会被细胞内的酯酶水解成DCFH。由于DCFH无法穿过细胞膜,因此荧光探针会在细胞内积聚。细胞内的ROS能够氧化无荧光的DCFH,生成有荧光的DCF,且荧光强度与ROS水平成正比。通过荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等设备,在最大激发波长480nm和最大发射波长525nm下检测荧光信号。
活性氧阳性诱导药物Rosup的荧光信号强度可用于分析细胞内活性氧的实际水平。这种方法提供了一种直观而灵敏的手段,通过检测荧光信号,我们能够准确评估细胞内ROS水平,为进一步研究细胞活动和疾病机制提供了重要的信息。


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