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荧光素酶检测

简要描述:是一种可被实验仪器非常方便检测到的化学基团、蛋白质或酶以及编码它们的基因。reporter可以通过实验手段非常容易被鉴定与检测,因此在实验中广泛应用。

例如,荧光素酶报告基因实验中运用的荧光素酶基因,以及qPCR中的荧光报告基团。

  • 更新时间:2024-03-22
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详细介绍

转录因子的 DNA 结合域和顺式作用元件实现共价结合,从而对基因的表达起抑制或增强的调控作用。荧光素酶报告基因实验就是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

荧光素酶(Luciferase):是能够催化底物氧化发光的一类酶的统称。

荧光素酶的种类很多,其中应用较为广泛的是萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,FLUC)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,RLUC)

在ATP、Mg2+、O2存在的条件下,虫荧光素在虫荧光素酶的催化下氧化发光,发光颜色为黄绿色。

(1)在质粒中,将靶启动子(或其他要研究的基因调控元件)插入到荧光素酶报告基因前方,构建成报告基因质粒。

(2) 将可以表达要检测的转录因子的质粒与报告基因质粒共转染细胞,如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。

(3)加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应,产生荧光,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。


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