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BCA法蛋白抽提定量实验

简要描述:BCA法蛋白抽提定量实验

BCA(Bicinchoninic acid)法是一种常用的蛋白质定量方法,它基于蛋白质在碱性条件下能够将铜离子(Cu^2+)还原为亚铜离子(Cu^+),随后BCA与Cu^+形成稳定的紫色复合物,该复合物在562nm处具有强烈的吸光度,其吸光度与蛋白质浓度呈正比。

  • 更新时间:2024-10-15
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详细介绍

BCA法蛋白抽提定量实验步骤

BCA(Bicinchoninic acid)法是一种常用的蛋白质定量方法,它基于蛋白质在碱性条件下能够将铜离子(Cu^2+)还原为亚铜离子(Cu^+),随后BCA与Cu^+形成稳定的紫色复合物,该复合物在562nm处具有强烈的吸光度,其吸光度与蛋白质浓度呈正比。


以下是使用BCA法蛋白抽提定量实验的基本步骤:

  

1.配制标准品和工作液:

  配制不同浓度的牛血清白蛋白(BSA)标准品溶液,通常线性范围为20-2000 μg/mL。

  配制BCA工作液,将BCA试剂A和BCA试剂B按50:1的比例混合。

  

2.样品处理:

  如果需要,对蛋白质样品进行适当的抽提和稀释。

  

3.加入BCA工作液:

  向含有标准品和待测样品的微孔板或试管中加入BCA工作液,样品与工作液的体积比通常为1:20。

  

4.孵育:

  将微孔板或试管在37°C下孵育30分钟,以促进颜色的发展。

  

5.冷却和读取吸光度:

  孵育结束后,让样品冷却至室温。

  使用酶标仪在562nm波长处测定样品的吸光度。

  

6.制作标准曲线:

  根据BSA标准品的吸光度绘制标准曲线,并计算样品中蛋白质的浓度。

  

注意事项:

  确保所有试剂在使用前充分混合且在推荐的温度下存储。

  严格按照试剂添加顺序和操作步骤进行,避免任何步骤的颠倒或省略。

  实验中应包括空白对照,以消除试剂本身的吸光度贡献。

以上步骤综合了多个搜索结果中的信息。在进行实验时,应遵循最新的实验指南和制造商的具体指示,以确保实验结果的准确性。


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