KO first小鼠动物模型

简要描述：KO first小鼠动物模型是一种多用途的条件基因敲除模型。该模型构建时，会利用基因编辑技术在目的基因的两侧插入方向相同的 LoxP 位点，并在靶片段 5' 端内含子中放置一个两侧带有 FRT 位点的 SA-IRES-reporter 片段，同时在目的基因敲除的外显子两侧各插入一个 LoxP 位点。

更新时间：2025-06-26
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详细介绍

一、核心定义与技术原理

KO first（又称Conditional Ready）是一种多用途基因敲除模型，通过双重组系统（Cre/loxP + Flp/FRT）实现基因功能的灵活调控。其核心目标是为同一基因提供两种研究路径：

全身性敲除（KO）：yong久性失活靶基因，同时启动报告基因表达。
条件性敲除（cKO）转换：通过重组获得Flox小鼠，用于组织特异性基因敲除。

分子结构设计

组件	功能	位置
同向loxP位点	被Cre重组酶识别，介导片段切除	靶基因关键外显子两侧
FRT-flanked 盒	含SA-IRES-reporter（报告基因）和Neo（抗性基因）	靶基因5'端内含子

二、构建流程与遗传操作

步骤1：初始模型制备

通过CRISPR/Cas9技术将上述结构插入小鼠基因组，获得floxed报告基因小鼠（即KO first基础品系）。

步骤2：双路径分化

关键操作说明：

Cre介导重组：切除Neo基因及floxed区域，使报告基因受内源启动子调控（用于基因表达定位）。
Flp介导重组：移除SA-IRES-reporter盒，保留两侧loxP位点，生成传统Flox小鼠。

案例：胚胎冻存品系构建

Fbn1-KO：敲除exon 65-66的冻存品系，需避免胚胎致死。
Prps1-KO：敲除exon 2的C57BL/6Smoc品系。

三、核心应用场景

1. 基因功能全景研究

应用方向	实现方式	案例
全身性功能缺失	直接使用KO first品系	Oprm1-KO研究多巴胺系统
时空特异性敲除	转换为Flox后交配组织特异性Cre	神经元Tau敲除（阿尔茨海默病）
基因表达动态追踪	报告基因可视化（如GFP/LacZ）	通过SA-IRES-reporter定位靶基因表达域

2. 疾病机制与治疗评估

免疫介导疾病：

α-Gal KO小鼠评估xin脏瓣膜钙化，抗Gal抗体滴度提升2倍，钙沉积量增加4倍。

神经系统疾病：

Cnr1-KO用于抑郁症及癫痫研究。

3. 药物靶点验证

多基因协同调控：通过Flp/Cre系统构建多基因cKO，模拟复杂疾病（如肿瘤微环境）

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KO first小鼠动物模型

一、核心定义与技术原理

分子结构设计

二、构建流程与遗传操作

步骤1：初始模型制备

步骤2：双路径分化

案例：胚胎冻存品系构建

三、核心应用场景

1. 基因功能全景研究

2. 疾病机制与治疗评估

3. 药物靶点验证

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