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组织切片的免疫荧光标记实验

更新时间:2023-12-21      点击次数:152

免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗

原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。


实验材料


组织样品


试剂、试剂盒


PBS 抗体


仪器、耗材


玻片 加湿盒


实验步骤



1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。
2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。
3.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片上加40~50 μl 抗体,应能盖住切片)。
4.  用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。

5.  以PBS冼玻片3次(5 min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。
6.  稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每载玻片可加40~50 μl 抗体)。
7.  将第二抗体加于切片上,置加湿盒中室温温育1 h,以PBS洗玻片3次(5 min/次)。


图一、免疫组化标记的各种方法

8.  将盖玻片放于纸巾上,滴加1滴Gelvatol 于盖玻片中央。翻过载玻片放于盖玻片上(勿施压),将玻片置工作台上,用铝箔覆盖避光放置30 min,使Gelvatol 凝结。

9.  显微镜下观察结果,或置玻片盒中贮于4℃。




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