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多重 PCR 扩增实验

更新时间:2023-12-21      点击次数:139

试剂、试剂盒          


Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物


仪器、耗材    


热循环仪


实验步骤      

 

一、材料

1. 酶和酶缓冲液

Taq 聚合酶


许多 Taq 聚合酶都可以用;作者发现 Roche 公司的 Taq 聚合酶可以满足大多数需要. 如果需要提高PCR 产物的特异性,应该使用热启动聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附带的缓冲液。

2. 核酸和寡核苷酸

1)溶于水的 DNA

如果 DNA TE 中,应该在 PCR 反应混合物中添加 MgCl2. 如果用从石蜡包埋的组织中纯化的DNA 做模板,选择的 STR 标记的大小应该是 78~250bp, 因为这些 DNA 模板的完整性不定。

参照 DNA 可以从外周血组织或者非恶性组织中纯化获得。对于白血病,則难以获得肿瘤 DNA 的合适的参照 DNA。因此,使用从患病期间和之后的血液中提取的 DNA 作参照进行分析。

肿瘤 DNA。很难避免非恶性细胞对肿瘤组织的污染。对肿瘤组织进行显微解剖是避免污染的一种途径,但是该过程费时,而且产量低(参见第 11 章).

为了保证获得 LOH 分析的信患,应该分析大量的样品。因此,纯化过程必须是可靠的,可重复的,保证可以从大量的样品中提取出高质量的 DNA。—种评估肿瘤 DNA 质董的方法就是利用一部分样品,使用 STR 对已经确定的特异类型的肿瘤染色体上的 LOH 进行分析。

2)引物


重要的一点就是细心地选择荧光基团以确保在所用的电泳仪器上能被检测到。例如,绿色的 TET 就不能在 ABI3100 仪器上使用。


标记的引物储备液可以保存在-20°C, 稀释之后的工作液可以在 4°C 保存. 放置黑盒中避光。

3. 专用设备

热循环仪


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