人胰腺癌裸小鼠模型

人胰腺癌裸小鼠模型

实验方法原理

          将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下，每周测量肿瘤大小，第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查，放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养，HE 染色。

实验材料         

裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌细胞株8988

试剂、试剂盒

RPMI-1640 *培养基胰酶戊二醛

仪器、耗材    

CO2 培养箱试管

实验步骤         

一、实验材料准备

裸小鼠BALB/ c nu- nu ，4～6 周龄，体重16～20 g，雌雄兼备，SPF 级环境中饲养，恒温25～27 ℃，恒湿45%～50% ，饮用水及食物均经灭菌。

二、人胰腺癌细胞株8988 体外传代培养

1.  将人胰腺癌细胞株放入含10 %的RPMI-1640 *培养基中，置于37 ℃、5 %CO2 培养箱中，每2d 换液1次，2～3d，0. 25 %的胰酶消化，一传3 传代培养。

2.  待细胞布满瓶底时,收集单细胞悬液，每只5 ×106 肿瘤细胞，0. 2ml ，注射于裸小鼠腋窝处皮下，建立肿瘤模型。

3.  每周用游标卡尺测量肿瘤大小，按公式V= π/ 6 ×长×宽×高，计算肿瘤大小，并绘制生长曲线。

三、血清学检测

第6 周时拔眼球法处死小鼠，收集血液于试管中，静置取血清，检测肿瘤相关抗原及淀粉酶。

四、巨检

1.  处死裸鼠后，皮下剥离肿瘤，记录质地、浸润、血供情况，观察有无腹腔粘连，各脏器转移状况。

2.  将肿瘤组织、肺、肝、脾、肠系膜、十二指肠、胃、脑等取标本置于10 %的福尔马林固定液中待用。

五、病理学检测

上述标本常规石蜡包埋切片，HE 染色，光镜观察。

六、超微结构观察

肿瘤组织2. 5 %戊二醛，1 %锇酸双固定，包埋，超薄切片，铀铅双重染色，透射电镜观察。

七、镜检

1.   肿瘤组织细胞培养及活细胞观察：取新鲜裸鼠皮下肿瘤组织，PBS 漂洗3 次，剪成1 m3 大小，0. 25 %的胰酶消化，去除粗大组织后，制成单细胞悬液，置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养，倒置显微镜下观察其形态、生长情况等， 并与细胞株8988 进行比较。

2.  细胞HE 染色及形态学观察：肿瘤细胞及细胞株相同量培养于含有盖玻片的六孔板中， 生长至次融合后，弃培养基，PBS 洗3 次，2. 5 %戊二醛固定，PBS 洗3 次，HE 染色，光镜下观察比较。