人胰腺癌裸小鼠模型
实验方法原理
将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下,每周测量肿瘤大小,第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查,放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养,HE 染色。
实验材料
裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌细胞株8988
试剂、试剂盒
RPMI-1640 *培养基胰酶戊二醛
仪器、耗材
CO2 培养箱试管
实验步骤
一、实验材料准备
裸小鼠BALB/ c nu- nu ,4~6 周龄,体重16~20 g,雌雄兼备,SPF 级环境中饲养,恒温25~27 ℃,恒湿45%~50% ,饮用水及食物均经灭菌。
二、人胰腺癌细胞株8988 体外传代培养
1. 将人胰腺癌细胞株放入含10 %的RPMI-1640 *培养基中,置于37 ℃、5 %CO2 培养箱中,每2d 换液1次,2~3d,0. 25 %的胰酶消化,一传3 传代培养。
2. 待细胞布满瓶底时,收集单细胞悬液,每只5 ×106 肿瘤细胞,0. 2ml ,注射于裸小鼠腋窝处皮下,建立肿瘤模型。
3. 每周用游标卡尺测量肿瘤大小,按公式V= π/ 6 ×长×宽×高,计算肿瘤大小,并绘制生长曲线。
三、血清学检测
第6 周时拔眼球法处死小鼠,收集血液于试管中,静置取血清,检测肿瘤相关抗原及淀粉酶。
四、巨检
1. 处死裸鼠后,皮下剥离肿瘤,记录质地、浸润、血供情况,观察有无腹腔粘连,各脏器转移状况。
2. 将肿瘤组织、肺、肝、脾、肠系膜、十二指肠、胃、脑等取标本置于10 %的福尔马林固定液中待用。
五、病理学检测
上述标本常规石蜡包埋切片,HE 染色,光镜观察。
六、超微结构观察
肿瘤组织2. 5 %戊二醛,1 %锇酸双固定,包埋,超薄切片,铀铅双重染色,透射电镜观察。
七、镜检
1. 肿瘤组织细胞培养及活细胞观察:取新鲜裸鼠皮下肿瘤组织,PBS 漂洗3 次,剪成1 m3 大小,0. 25 %的胰酶消化,去除粗大组织后,制成单细胞悬液,置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养,倒置显微镜下观察其形态、生长情况等, 并与细胞株8988 进行比较。
2. 细胞HE 染色及形态学观察:肿瘤细胞及细胞株相同量培养于含有盖玻片的六孔板中, 生长至次融合后,弃培养基,PBS 洗3 次,2. 5 %戊二醛固定,PBS 洗3 次,HE 染色,光镜下观察比较。