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人胰腺癌裸小鼠模型

发布时间:2022-05-14      点击次数:103

人胰腺癌裸小鼠模型

 

实验方法原理

 

          将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下,每周测量肿瘤大小,第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查,放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养,HE 染色。

 

实验材料         

 

裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌细胞株8988

 

试剂、试剂盒


RPMI-1640 完全培养基胰酶戊二醛

 

仪器、耗材    

 

CO2 培养箱试管

 

实验步骤         

 

一、实验材料准备

 

裸小鼠BALB/ c nu- nu 4周龄,体重1620 g,雌雄兼备,SPF 级环境中饲养,恒温2527 ℃,恒湿45%50% ,饮用水及食物均经灭菌。

 

二、人胰腺癌细胞株8988 体外传代培养

 

1.  将人胰腺癌细胞株放入含10 %RPMI-1640 完全培养基中,置于37 ℃、5 %CO2 培养箱中,每2d 换液1次,23d0. 25 %的胰酶消化,一传传代培养。

 

2.  待细胞布满瓶底时,收集单细胞悬液,每只×106 肿瘤细胞,0. 2ml ,注射于裸小鼠腋窝处皮下,建立肿瘤模型。

 

3.  每周用游标卡尺测量肿瘤大小,按公式V= π/ 6 ×长×宽×高,计算肿瘤大小,并绘制生长曲线。

 

三、血清学检测

 

周时拔眼球法处死小鼠,收集血液于试管中,静置取血清,检测肿瘤相关抗原及淀粉酶。

 

四、巨检

 

1.  处死裸鼠后,皮下剥离肿瘤,记录质地、浸润、血供情况,观察有无腹腔粘连,各脏器转移状况。

 

2.  将肿瘤组织、肺、肝、脾、肠系膜、十二指肠、胃、脑等取标本置于10 %的福尔马林固定液中待用。

 

五、病理学检测

 

上述标本常规石蜡包埋切片,HE 染色,光镜观察。

 

六、超微结构观察

 

肿瘤组织2. 5 %戊二醛,1 %锇酸双固定,包埋,超薄切片,铀铅双重染色,透射电镜观察。

 

七、镜检

 

1.   肿瘤组织细胞培养及活细胞观察:取新鲜裸鼠皮下肿瘤组织,PBS 漂洗次,剪成1 m3 大小,0. 25 %的胰酶消化,去除粗大组织后,制成单细胞悬液,置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养,倒置显微镜下观察其形态、生长情况等, 并与细胞株8988 进行比较。

 

2.  细胞HE 染色及形态学观察:肿瘤细胞及细胞株相同量培养于含有盖玻片的六孔板中, 生长至次融合后,弃培养基,PBS 次,2. 5 %戊二醛固定,PBS 次,HE 染色,光镜下观察比较。


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