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Transwell实验技术

发布时间:2022-05-19      点击次数:161

微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell 实验):应用微孔滤膜培养小室,进行胶质瘤细胞与内皮细胞的联合培养,可以更接近体内环境,模拟瘤细胞对血管内皮细胞的作用,滤膜上8μm的微孔可允许内皮细胞穿过到达膜的下面,这些穿越迁移的内皮细胞可粘附于膜的下面,通过计数滤膜下面的细胞可基本反映细胞的迁移情况。Transwell的基本原理是将Transwell小室放入培养板中,小室内称为上室,培养板内称为下室,上室内添加上层培养液,下室内添加下层培养液,上下层培养液以膜相隔。将细胞种在上室内,由于膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影。选择不同材料的膜和孔径,可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

(一)实验材料及试剂

24孔培养板、Transwell小室、倒置显微镜、酒精灯、移液枪、CO2培养箱、细胞计数板等;血清、低血清DMEM培养液、多聚甲醛、结晶紫、PBS等。

(二)实验内容

1、分别取实验分组的细胞种板前1天,血清饥饿12小时,常规消化、离心收集细胞,用低血清DMEM培养液(含0.2% FBS)混悬成密度为5×105/ml的单细胞悬液。

2、将Transwell小室放入24孔培养板中,上室内加入100 μl细胞悬液(约5×104细胞),下室内加入500 μl含10% FBS的DMEM培养液。

3、置于5% CO2,37℃孵箱培养24小时后,PBS洗2次,用棉球小心擦去上室内细胞,4%多聚甲醛固定20~30 min,PBS洗2次,0.1 %结晶紫染色30 min,PBS洗2次,去掉多余染料,显微镜下观察拍照。

(三)注意事项

Transwell小室可重复利用多次,但在棉签擦拭的时候力度避免过大,以免损伤小室膜;重复使用之前可观察小室膜是否出现裂痕,若出现较多裂痕可停止使用。


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