活力染色技术

一、实验原理

    各种细胞操作，包括传代、冻存和原代组织的分离，均能导致细胞死亡。为了确定群体细胞中的存活细胞数，可采用台盼蓝染料排斥实验（Phillips 1973)。正常的健康细胞能排斥染料，但细胞膜完整性丧失后台盼蓝可弥散入细胞内。染料排斥实验是一种粗糙的估计细胞活力的方法，无法区别 10%~20% 的活力差异。除此之外，排斥染料的细胞有可能不贴壁或不能较长时问生存或繁殖。

    二、实验方法

    1) 胰蛋白酶处理细胞，无菌状态下取 0.5 ml 细胞用 PBS 稀释至每毫升 2X105~4X105。

    2) 向另一管中无菌加人 0.5 ml 上述细胞稀释液，并加人 0.5 ml 台盼蓝溶液 (0.4%）

    3) 细胞在染料中停留时间为不短于 3 分钟、不超过 10 分钟, 用毛细吸管取含染料的细胞悬液，靠毛吸作用使其进入计数器内。

    4) 至少计数总数 500 个细胞，蓝色细胞单独计数。记录不排斥染料的蓝色细胞的出现频度。

    5) 根据不排斥染料的细胞数计数细胞的活力百分比。

    例如：单层细胞胰蛋白酶处理后重悬于 5 ml 培养液中, 取 0.5 ml 细胞与 4.5 ml PBS 混匀，吸取 0.5 ml 悬浮于 PBS 中的细胞加于另一小管中，再加人 0.5 ml 台盼蓝溶液混匀。上述悬液加于计数器上，共计数 540 个细胞，62 个细胞不排斥染料呈蓝色，活性百分比为 88.5%。