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新生小鼠原代心肌成纤维细胞的分离与培养

更新时间:2024-03-28      点击次数:87

1. 准备0-1天内的C57BL/6J鼠新生鼠。

2. 用温的无菌去离子水,轻轻擦拭每只新生鼠。

3. 70%的乙醇去除新生鼠身体上的污染物。

4. 断头,取心脏,心脏置于冰的PBSG溶液中。

5. 除去血液和非心脏组织。

6. 剪碎心脏组织。

7. 加入胰酶-胶原酶消化液,每只新生鼠75ul

8. 37°C的摇床培养箱中,以250 rpm/ 5 min,消化心肌组织

9. 轻轻涡旋,然后离心10秒,丢弃第一次消化的上清液。

10. 开始第二次消化,250 rpm/ 5 min轻轻涡旋,然后离心10秒,收集上清液到2倍体积的胎牛血清中。

11. 重复上述消化过程,共进行8次消化,收集细胞悬液。

12. 使用没有包被的10cm大皿,预种植细胞1h

13. 1小时后,将培养皿从培养箱中取出,移除没贴壁的细胞上清液,加入完丨全培养基继续培养。


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