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成年小鼠关节软骨细胞原代培养

更新时间:2024-03-28      点击次数:195

1. C57小鼠,8-10周,通过颈椎脱位处死浸入75%乙醇浸泡5分钟,转移到通风柜中的解剖盘中。

2. 使用眼科剪和镊子,使髋关节脱臼,保持股骨头完整

3. 用止血钳去除每个股骨头的软骨帽,将组织放入含2%双抗的PBS中。

4. 用冰冷的含2%双抗的PBS清洗2-3遍,将关节软骨小心移到2ml离心管中。

5. 用眼科剪刀将软骨帽剪成约1mm3的碎片,加入3ml预热的Collagenase D1.5mg/ml)。

6. 放入37℃、80rpm的摇床中进行第一次消化,时间2h

7. 第一次消化结束后,加入含血清的培养基终止消化,40um的细胞筛过滤后,离心1500rpm2min

8. 沉淀用DMEM完丨全培养基重悬,计数,种植在24孔板中。

9. 在未消化的组织中加入3ml预热的Collagenase D,放入37℃、80rpm的摇床中进行第二次消化,时间2h,然后收集细胞。


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