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HE染色实验时有哪些需要注意的呢?

更新时间:2024-09-09      点击次数:77
  HE染色实验,全称为苏木精和伊红染色方法,是病理学染色技术中最基本也是最重要的一种。该方法通过区分细胞核和细胞质的酸碱性特性,将它们分别染成蓝色和红色,从而满足形态学观察的需求。
  苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
  细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物。细胞浆的染色与pH值有密切关系。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
  HE染色实验的注意事项:
  1、切片制备
  切片厚度大小:切片的厚度和大小会影响染色效果,因此需要根据实验需求选择合适的切片。
  固定清洗:将切片放入固定液中以防止组织中的水分蒸发,并保持组织结构的完整性。常用的固定液包括甲醛、乙醇等。之后用清水清洗切片,去除固定液的影响。
  2、固定清洗
  样品制备:对于贴壁生长的细胞,胰酶消化后调整细胞浓度滴加于盖玻片上,培养相应时间后取出并用PBS洗涤。
  样品固定:用95%乙醇固定20分钟,再用PBS洗涤两次。
  3、染色冲洗
  染核:用苏木素染液染色2-3分钟,之后用自来水冲洗。若染色过深,可用1%盐酸酒精溶液分色,再水洗。
  染胞质:浸入伊红染液染色1分钟,再次用自来水冲洗。
  4、封固观察
  封固:吹干或自然晾干细胞爬片后,使用中性树胶封片。
  镜检观察:在显微镜下观察染色效果。若染色不均匀或颜色不鲜明,可能需要调整染色时间和分化时间。
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