HE染色实验是生物医学中常用的一种染色技术,尤其在病理学、组织学和胚胎学等领域具有广泛应用。其HE染色通过利用苏木精和伊红两种染料的酸碱性质,将组织切片中的细胞核和细胞质分别染成蓝色和红色,从而清晰地显示出组织或细胞的形态结构。苏木精是一种碱性染料,能将细胞核内的染色质和胞质内的核酸染成蓝紫色;而伊红是一种酸性染料,能使细胞质和细胞外基质中的成分染成红色。这种染色方法不仅简单易行,而且染色效果稳定,适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色,可长期保存。
HE染色实验的步骤主要包括脱蜡、染色、脱水和封片等环节。下面将详细介绍这些步骤:
1、样品制备
固定:对于贴壁生长细胞,胰酶消化后调整细胞浓度并滴加于盖玻片上,培养相应时间后取出细胞爬片,用PBS洗涤。
固定液处理:使用95%乙醇固定20分钟,然后用PBS洗涤。
2、苏木素染细胞核
染色:切片入Harris苏木素染液中染色3-8分钟,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,0.6%氨水返蓝,流水冲洗。
分色:若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。
3、伊红染细胞质
染色:切片入伊红染液中染色1-3分钟。
4、脱水封片
脱水:将切片依次放入95%酒精I 5分钟-95%酒精II 5分钟-无水乙醇Ⅰ5分钟-无水乙醇Ⅱ5分钟-二甲苯Ⅰ5分钟-二甲苯Ⅱ5分钟中脱水透明,从二甲苯拿出来稍晾干。
封片:中性树胶封片。
5、显微镜镜检
图像采集分析:在显微镜下观察染色结果,并进行图像采集和分析。