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  • 2022

    5-23

    细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下,通过DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等复杂反应而进行的分裂系列过程。其中核DNA的复制倍增是整个过程的重要特征。细胞增殖检测技术广泛应用于分子生物学遗传学肿瘤生物学免疫学药理和药代动力学等研究领域。检测细胞存活与增殖的方法主要包括观察DNA合成含量和检测细胞代谢活性两种,前者主要有Brdu、EDU检测等,后者主要有MTT、CCK8等检测,客户可根据处理药物数量等因素选择合适的检测方法。

  • 2022

    5-23

    血管形成体外模型可分为细胞水平的增殖实验、迁移实验和管腔形成实验,以及器官水平的人胎盘血管段培养模型和大鼠动脉环模型。目前通常所说的血管形成实验是指管腔形成实验。管腔形成反映毛细血管的早期过程,是体外检查内皮细胞功能最完整的指标。血管形成过程中内皮细胞会形成细胞条索,然后形成管腔,体外在特定条件下如基质胶、胶原等培养时也能形成管腔。药物通过抑制管腔形成或使形成的管腔断裂来达到抑制血管形成的作用。借助计算机软件计算小管数及小管之间的连接数及小管的长度和面积,可定量分析药物对管腔...

  • 2022

    5-23

    荧光素酶报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪(化学发光仪)测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。双荧光素酶体系,即有两种荧光素酶,比较常见的组合是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶,萤火...

  • 2022

    5-19

    【实验方法与步骤】(1)细胞凋亡的诱导:HeLa细胞常规传代培养至对数生长期(见细胞传代培养)。实验组细胞加入顺铂溶液(生理盐水配置)至终浓度为20μmo1/L,37℃,5%CO2条件下继续培养。空白实验对照加入等体积的生理盐水,同样条件继续培养。24h后进行染色及形态学观察。(2)胰酶消化细胞,将培养基上清及消化下来的细胞一同转入离心管中600~800r/min离心10min。(3)吸去上清,用1mLPBS重悬细胞沉淀,并转入1.5mL微量离心管中,600~800r/min...

  • 2022

    5-19

    微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell实验):应用微孔滤膜培养小室,进行胶质瘤细胞与内皮细胞的联合培养,可以更接近体内环境,模拟瘤细胞对血管内皮细胞的作用,滤膜上8μm的微孔可允许内皮细胞穿过到达膜的下面,这些穿越迁移的内皮细胞可粘附于膜的下面,通过计数滤膜下面的细胞可基本反映细胞的迁移情况。Transwell的基本原理是将Transwell小室放入培养板中,小室内称为上室,培养板内称为下室,上室内添加上层培养液,下室内添加下层培养液,上下层培养液以膜相隔。将...

  • 2022

    5-19

    一、实验原理各种细胞操作,包括传代、冻存和原代组织的分离,均能导致细胞死亡。为了确定群体细胞中的存活细胞数,可采用台盼蓝染料排斥实验(Phillips1973)。正常的健康细胞能排斥染料,但细胞膜完整性丧失后台盼蓝可弥散入细胞内。染料排斥实验是一种粗糙的估计细胞活力的方法,无法区别10%~20%的活力差异。除此之外,排斥染料的细胞有可能不贴壁或不能较长时问生存或繁殖。二、实验方法1)胰蛋白酶处理细胞,无菌状态下取0.5ml细胞用PBS稀释至每毫升2X105~4X105。2)向...

  • 2022

    5-19

    一、细胞转染细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染两大类。本实验室主要是质粒转染、miRcroRNA转染、慢病毒转染、药物转染、多肽转染等。二、miRcroRNA转染(一)实验材料及试剂六孔板、CO2培养箱、EP管、酒精灯等;无血清培养基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC细胞等。(二)实验内容1当六孔板中MSC细胞密度达90%时,准备转染,将无血清培养基、MEM-α或DMEM取出...

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