1.组织4℃条件下从医院取回。
2.消毒取样的15ml管,取出组织,放到10ml大皿中。
3.用含4抗的PBS溶液浸泡,清洗组织。
4.再用组织缓冲液浸泡、清洗三遍。
5.将组织剪成1mm3大小的组织块,转移到15ml管中消化。
6.在37℃水浴锅中,消化15min。
7.取少量液体在显微镜下观察,看到较多的单细胞和较少的细胞簇后,终止消化。
8.用100μm筛过滤,然后300g4℃离心5min,移去上清。
9.重悬沉淀,转移到2ml离心管中,300g4℃离心5min,移去上清。
10.估算沉淀的细胞量,以1:25的比例添加基质胶,重悬。
11.24孔板铺板,冰上操作,每孔点胶25ul。
12.铺板后,放到37℃细胞培养箱中15min成胶。
13.然后每孔添加600ul 结直肠癌类器官培养基,放到37℃细胞培养箱中。
本次会议,提升公司对结直肠癌类器官原代培养的重要知识点的认知