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新生小鼠原代心肌成纤维细胞的分离与培养分享

更新时间:2024-05-23      点击次数:105

2024年59日,周,公司组织,由实验室主管刘博主导,实验室全体成员参与,对新生小鼠原代心肌成纤维细胞的分离与培养相关知识点,进行了培训与交流。本次会议,主要针对新生小鼠原代心肌成纤维细胞的分离与培养,就以下内容展开了交流

1. 准备0-1天内的C57BL/6J小鼠新生鼠。

2. 用温的无菌去离子水,轻轻擦拭每只新生鼠。

3. 用70%的乙醇去除新生鼠身体上的污染物。

4. 断头,取心脏,心脏置于冰的PBSG溶液中。

5. 除去血液和非心脏组织。

6. 剪碎心脏组织。

7. 加入胰酶-胶原酶消化液,每只新生鼠75ul。

8. 在37°C的摇床培养箱中,以250 rpm/ 5 min,消化心肌组织。

9. 轻轻涡旋,然后离心10秒,丢弃第一次消化的上清液。

10. 开始第二次消化,250 rpm/ 5 min后,轻轻涡旋,然后离心10秒,收集上清液到2倍体积的胎牛血清中。

11. 重复上述消化过程,共进行8次消化,收集细胞悬液。

12. 使用没有包被的10cm大皿,预种植细胞1h。

13. 1小时后,将培养皿从培养箱中取出,移除没贴壁的细胞及上清液,加入培养基继续培养。

 

本次会议,提升公司对新生小鼠原代心肌成纤维细胞的分离与培养的重要知识点的认知


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