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细胞增殖实验技术服务

简要描述:细胞增殖实验技术服务包括MTT实验、CCK-8实验、平板克隆、划痕实验等,由达为科生物细胞平台的实验人员操作完成。细胞平台所有实验员均有丰富的实验经验,熟练的操作技术。

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍

     细胞增殖是生物体的重要生命特征,单细胞生物以细胞分裂的方式产生新的个体,多细胞生物以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老和死亡的细胞。

CCK-8常应用于检测细胞的增殖能力。CCK-8试剂中含有WST–8:化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比,用酶标仪在450nm波长处测定其吸光度值(OD值)来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。

MTT常应用于检测细胞的增殖能力,其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan),并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在490nm波长处测定其吸光度值(OD值),在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。

单个细胞在体外增殖6代以上(时间约1周以上),其后代所形成的细胞群体,称为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3-1.0mm之间。细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数,但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖并形成克隆。只有同时具有贴壁和增殖活力的细胞才会形成克隆。

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