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细胞平板克隆检测

简要描述:细胞平板克隆检测:是测定细胞增殖能力的有效方法之一,细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量,可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍


平板克隆形成1基本原理
克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一,贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量,可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

所需材料· 细胞生长培养基

· 胎牛血清

· 胰蛋白酶

· PBS

·  青霉素-链霉素溶液(100X)

· 吉姆萨染液

3实验步骤1.取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛血清的细胞生长培养基中备用。

2.将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞每皿分别接种100个细胞于含10ml 37℃预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。

3.置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。

4.当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。

5.加纯甲醇或1:3醋酸/甲醇5ml,固定15分钟。

6.去固定液,加适量Giemsa应用染色液染10~30分钟

7.用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。

8.将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数克隆,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。后计算克隆形成率。

克隆形成率=(克隆数/接种细胞数)×100%

9.平板克隆形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。

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