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病理TUNEL

简要描述:病理TUNEL:基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测.

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍

细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

Tunel染色

(1) 脱蜡:65℃、30min;二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ;

(2)水化:将脱蜡后的切片经100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、双蒸水各3min ;

(3)消化:将玻片浸入胰蛋白酶内消化40分钟,PBS洗3min×3次。

(4)制备TUNEL反应混合液。

(5)加50μl TUNEL反应混合液于标本上,加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃反应1h;PBS洗3min×3次。

(6)加50ul POD于标本上,加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×30min,PBS洗3min×3次。

(7)DAB染色3-10min,自来水冲洗,苏木素复染, 1%盐酸酒精分化,显微镜下观察,控制染色程度。

(8)脱水:75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精,逐级脱水、各3min.

(9)透明:二甲苯透明3min×2次。

(10)中性树胶封片。

注:

以上是石蜡包埋样本的处理方式

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