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1原理:TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感复合物,1894年*合成用来检测种子的生存能力,1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体,与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。
2 取脑:可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定,所以较软,取脑时更应仔细,保持大脑的完整性。
3 -20度冰箱中速冻20分钟左右,便于切片。
4 切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。第*刀在脑前极与视交叉连线中点处;第二刀在视交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。(参考:张均田,主编.现代药理试验方法)。如果需计算面积的话,应切得均匀或用专门的脑槽。
5将切片置于TTC中,常规浓度为2%,也有用1%或更低浓度的。
6用锡箔纸盖住后,放入37C温箱15~30min,不时翻动脑片,使均匀接触到染色液。也可以用将脑片放入多孔板,再滴入TTC,覆以圆形盖玻片使均匀染色。
7 染色后效果:为皮层下梗死。
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