详细介绍
(1)冰冻切片厚度 6~10µm,不固定或 10%福尔马林固定 10min后水洗
(2)切片加入60%的异丙醇内浸洗 2min
(3)用冰蒸馏水稍微清洗一遍(说明书没说明要洗)
(4)切片加入改良油红 O 染色液中,密闭染色 10~15min,该过程注意避光
(5)用冰蒸馏水清洗一遍(说明书没说明要洗)
(6)加入 60%的异丙醇内稍洗以去除染液(大约几秒)
(7)加入冰蒸馏水中稍微清洗一遍
(8)Mayer 苏mu素染色液复染核 5min
(9)用冰蒸馏水清洗一遍
(10)片子用滤纸吸干水分
(11)用甘油明胶或阿拉伯糖胶封片。
1. 石蜡切片不能用于油红O染色,原因在于石蜡包埋过程中需要脱水,脱水过程中需要乙醇-二甲苯和石蜡,二甲苯是有机溶剂,会把中性脂肪溶解;
2. 冰冻切片准备时,包埋的降温过程建议选择干冰,原因在于若选择液氮降温过程较强烈,可能导致组织内部炸裂,而干冰降温的过程比较缓和,染出来的片子比较好看;
3. 切片的厚度要稍微厚一些,建议选择8-10μm;
4. 实验设计建议设计阴性对照和阳性对照,如阳性对照可以用脂质丰富的肝脏组织等,阴性对照可以根据文献来选择无脂肪沉积的组织。
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