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瑞士姬姆萨复合染色

简要描述:瑞士姬姆萨复合染色染大量样品特别是切片样品时,吉姆萨染色的用途更广。吉姆萨(Giemsa)染色法常用于血液学、脱落细胞学和病原生物学的显微观察。该法实际上是一种双重染色,特点是碱性和酸性染色剂同时着染。

  • 更新时间:2024-04-12
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详细介绍

瑞士姬姆萨复合染色原理

吉姆萨(Giemsa)染色法常用于血液学、脱落细胞学和病原生物学的显微观察。该法实际上是一种双重染色,特点是碱性和酸性染色剂同时着染。其中,碱性染色剂主要为天青II(azure B,天青为亚甲基蓝的氧化形式),酸性染色剂为伊红Y,染色结果清晰。美中不足是染色后如果常规脱水会褪色,因此只能晾干封片。这就限制了本法在常规切片染色中的应用。

吉姆萨固体粉剂含有天青II和伊红Y这两种染色剂,通常能购买到现成的商品。如果没有,可将伊红Y与天青II按一定质量比混合,效果相当。

根据经验,染血细胞和某些脱落细胞,伊红和天青的质量比为15 ꞉4(A型);如果染一般切片的结构,伊红与天青的质量比为3꞉4(B型)。如果加入亚甲基蓝,伊红、天青、亚甲基蓝的质量比为2꞉1꞉4(C型),染细胞和切片均可。有时嫌伊红着色太浅,也可在配制染液时额外补充少量伊红(配液要用甲醇;有的甲醇纯度不够,可能含有微量乙酸成分,会沉淀部分伊红)。

吉姆萨染液一般先配制成母液储存,临用前用缓冲液稀释成工作液。

瑞士姬姆萨复合染色注意事项

配制时,先将吉姆萨粉剂用丙三醇少量多次研磨溶解,然后密闭于60 ℃恒温箱2 h;加入甲醇并充分混匀后,继续放置在37 ℃恒温箱24 h,然后过滤即为母液。如果无明显沉淀物,也可直接密闭保存。只要严格密闭、避光,母液的稳定性良好,至少可存放5年。保存期间严禁吸潮,否则容易产生沉淀而失效。

临用前取上述母液,用pH 6.8 ~ 7.0的缓冲液按1꞉ 9(v/v)稀释并过滤,即为染色工作液。工作液必须在数小时内用完,否则很快产生沉淀,失去染色效力。

具体方法如下:

血液等涂片稳固后,须用甲醇充分固定5 ~ 15 min;

→ 稍晾干,浸入吉姆萨工作液染色15 ~ 30 min(根据标本情况预试确定时间);

→ 蒸馏水或pH 6.8 ~ 7.0的磷酸盐缓冲液漂洗涂片1 ~ 3 min;

→ 蒸馏水快速漂洗;

→ 空气中自然晾干玻片;

→ 滴加中性树胶,加盖玻片封固。



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