瑞士姬姆萨复合染色

瑞士姬姆萨复合染色原理

吉姆萨（Giemsa）染色法常用于血液学、脱落细胞学和病原生物学的显微观察。该法实际上是一种双重染色，特点是碱性和酸性染色剂同时着染。其中，碱性染色剂主要为天青II（azure B，天青为亚甲基蓝的氧化形式），酸性染色剂为伊红Y，染色结果清晰。美中不足是染色后如果常规脱水会褪色，因此只能晾干封片。这就限制了本法在常规切片染色中的应用。

吉姆萨固体粉剂含有天青II和伊红Y这两种染色剂，通常能购买到现成的商品。如果没有，可将伊红Y与天青II按一定质量比混合，效果相当。

根据经验，染血细胞和某些脱落细胞，伊红和天青的质量比为15 ꞉4（A型）；如果染一般切片的结构，伊红与天青的质量比为3꞉4（B型）。如果加入亚甲基蓝，伊红、天青、亚甲基蓝的质量比为2꞉1꞉4（C型），染细胞和切片均可。有时嫌伊红着色太浅，也可在配制染液时额外补充少量伊红（配液要用甲醇；有的甲醇纯度不够，可能含有微量乙酸成分，会沉淀部分伊红）。

吉姆萨染液一般先配制成母液储存，临用前用缓冲液稀释成工作液。

瑞士姬姆萨复合染色注意事项

配制时，先将吉姆萨粉剂用丙三醇少量多次研磨溶解，然后密闭于60 ℃恒温箱2 h；加入甲醇并充分混匀后，继续放置在37 ℃恒温箱24 h，然后过滤即为母液。如果无明显沉淀物，也可直接密闭保存。只要严格密闭、避光，母液的稳定性良好，至少可存放5年。保存期间严禁吸潮，否则容易产生沉淀而失效。

临用前取上述母液，用pH 6.8 ~ 7.0的缓冲液按1꞉ 9（v/v）稀释并过滤，即为染色工作液。工作液必须在数小时内用完，否则很快产生沉淀，失去染色效力。

具体方法如下：

血液等涂片稳固后，须用甲醇充分固定5 ~ 15 min；

→ 稍晾干，浸入吉姆萨工作液染色15 ~ 30 min（根据标本情况预试确定时间）；

→ 蒸馏水或pH 6.8 ~ 7.0的磷酸盐缓冲液漂洗涂片1 ~ 3 min；

→ 蒸馏水快速漂洗；

→ 空气中自然晾干玻片；

→ 滴加中性树胶，加盖玻片封固。