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β-半乳糖苷酶染色

简要描述:β-半乳糖苷酶染色细胞衰老是细胞在正常环境条件下发生的功能减退、逐渐趋向死亡的现象。衰老的细胞虽然生长发生不可逆性停滞,不能进入S期,但仍具有代谢功能,而且比年轻细胞的抗凋亡能力强,可以继续生存。其特征是细胞体积变大,呈扁平状;细胞核变大,核膜内陷,染色质聚集、固缩、裂解;胞质内颗粒增加,有空泡形成;线粒体的数目及形状发生改变;膜流动性降低;溶酶体内容物增多,导致溶酶体酶β-半乳糖苷酶活性升高。

  • 更新时间:2024-04-12
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详细介绍

β-半乳糖苷酶染色

细胞衰老是细胞在正常环境条件下发生的功能减退、逐渐趋向死亡的现象。衰老的细胞虽然生长发生不可逆性停滞,不能进入S期,但仍具有代谢功能,而且比年轻细胞的抗凋亡能力强,可以继续生存。其特征是细胞体积变大,呈扁平状;细胞核变大,核膜内陷,染色质聚集、固缩、裂解;胞质内颗粒增加,有空泡形成;线粒体的数目及形状发生改变;膜流动性降低;溶酶体内容物增多,导致溶酶体酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老细胞所具有的上述特征成为各种细胞衰老检测手段的依据。


(1)细胞接种前在6孔培养板中预先放置灭菌的细胞片a,每孔加入1x105个细胞,37℃ 5% CO2

条件下培养过夜,使细胞在细胞片上生长。

(2)在超净工作台中吸弃6孔培养板中的培养液a,加入x1PBS,洗涤细胞1次,随后加入2%甲

醛/0.2%戊二醛固定液a,室温条件下固定3~5分钟。

(3)吸弃2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,加入x1PBS,洗涤细胞3次,每次3分钟。

(4)吸弃x1PBS,加X-Gal溶液以浸没细胞片为宜,37℃孵育4~8小时或过夜,用保鲜膜包被6

孔培养板以防染液蒸发。

(5)取出细胞爬片,去离子水。冲洗2次,再次用固定液固定4分钟,流水轻轻冲洗。

(6)将细胞爬片按此顺序脱水、透明:95%酒精I(2分钟)→95%酒精Ⅱ°(2分钟)→100%酒精

| (2分钟)→100%酒精I(5分钟)→二甲苯|(2分钟)→二甲苯Ⅱª(2分钟)。

(7)中性树胶封片。

(8)在普通光学显微镜下观察衰老细胞形态。

每张片子镜下计数400个细胞,确定X-Gal染色阳性细胞(衰老细胞)在细胞群体中的所占的百分

比即衰老细胞率(蓝染细胞数/总计细胞数x100%).


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