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人肝癌原位小鼠动物模型实验
构建人肝癌原位小鼠动物模型是为了模拟人类肝癌的生长和发展,以便于研究肝癌的发病机制、药物筛选和治疗策略的评估。
以下是人肝癌原位小鼠动物模型实验的一般步骤:
1.选择合适的小鼠品系:通常选择免疫缺陷的小鼠品系,如裸鼠(nude mice)或NOD/SCID小鼠,以减少对人肝癌细胞的免疫排斥。
2.准备肝癌细胞:选择合适的人肝癌细胞系,如HepG2、Huh-7等,并在体外培养至适宜的密度和传代。
3.细胞接种:将肝癌细胞悬液直接注入小鼠的肝脏内,通常通过腹腔注射或切开肝脏进行原位接种。接种量需根据小鼠的大小和预期的肿瘤负荷来决定。
4.模型监控:接种后,定期监测小鼠的体重和健康状况,使用影像学方法(如超声心动图)跟踪肿瘤的生长。
5.实验终点:根据研究目的设定实验终点,可能是肿瘤体积达到一定大小、小鼠出现明显症状或实验预定时间到达。
6.样本收集:在实验终点处死小鼠,收集肿瘤组织和相关器官样本,进行后续的组织学和分子生物学分析。
例如:
实验动物: 裸鼠,雌雄各半,4-6周,18-20g
造模方法: 将Huh-7细胞消化后,收集到一起。无血清的培养基洗涤一次后进行细胞计数。将计数好的细胞用无血清的培养基重悬调整细胞密度待用。采用裸鼠进行腹腔麻醉,取仰卧位固定在手术板上,常规皮肤消毒,在裸鼠左肋下作一横行切口,然后逐层剪开皮肤暴露肝左叶。用细胞悬液,30°角刺入肝脏左叶,缓慢的注入细胞悬液,注射完毕后用无菌纱布轻压针孔至肝脏表面不再出血,逐层缝合关腹,待小鼠清醒后放回原饲养环境。
浙江大学赵斌及梁廷波团队通过体内原位基因编辑技术建立了25种具有特定基因型的原发性小鼠肝癌模型,并通过多组学联合分析阐明了这些
模型的异质性特征。这些模型能够更好地模拟人类肝癌的多样性和复杂性,适用于机制研究和临床前测试。
在建模过程中,应严格遵守动物福利和伦理规定,确保实验设计的合理性和必要性。在进行实验前,应获得相应伦理委员会的批准。
参考
[1]尹君, 李景丁莎, 左从林, 等. 人源性肝癌细胞小鼠原位移植瘤模型的建立及特点的比较研究[J]. 中国比较医学杂志, 2018,28(12):68-74.
[2]Tang M, Zhao Y, Zhao J, et al. Liver cancer heterogeneity modeled by in situ genome editing of hepatocytes[J]. Sci Adv, 2022,8(25):eabn5683.
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