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悬浮细胞的免疫荧光标记实验

发布时间:2022-05-07      点击次数:158

免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。


实验材料    

     

悬浮细胞


试剂、试剂盒     

    

多聚-L-赖氨酸


仪器、耗材     


离心机培养箱


实验步骤        


1.  细胞在冰浴中冷却,然后用台式离心机于4℃以800 g 离心5 min,吸去培养液并以4PBS重悬细胞。

 

2.  离心吸去PBS,以1~2 ml 2%PFA固定液,或2%PFA固定液/0.1% Triton X-100重悬细胞,置冰上固定30 min

 

3.  离心、吸去固定液,用15 ml 4 PBS重悬细胞,放5 min 后,用PBS再次洗涤细胞。

 

4.  稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min250 μ抗体足够用于5×106细胞。

 

5.  离心细胞,吸去PBS,重悬细胞于第一抗体中,置4℃温育1 h

 

6.  4 PBS稀释细胞和抗体至15 ml

 

7.  离心,吸去PBS,以4 PBS重悬细胞,重复1次。

 

8.  第二抗体4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min5×106细胞用250 μ抗体足够。

 

9.  吸去PBS,以第二抗体重悬细胞,4℃温育1 h,重复步骤6及步骤7

 

10.  除非立即观察细胞,否则在进行细胞浓缩的下一步操作之前应以铝萡包裹离心管并冷藏。


11.  离心细胞并以少量PBS重悬(勿用水),将细胞悬液滴于多聚-L-赖氨酸覆层的载玻片上,加上盖玻片,尽可能马上观察结果。


此文转载:丁香通


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