原位杂交实验

简要描述：原位杂交实验（in situ hybridization）将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交。用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

更新时间：2022-12-22
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原位杂交实验步骤：前期胚胎的制备。

原位杂交**天进行重新水化和固定、预杂交、杂交。

原位杂交第二天进行 1 将探针回收，放于－20C保存（通常探针可重复使用十次左右）2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。3置换2XSSCT1ml，60℃，放置15分钟。4置换0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。5用MABT洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。6室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。 7 按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连**抗体，4C 冰箱过夜。

原位杂交第三天进行1）用1ml含10%热灭**清的MABT溶液置换抗体溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。2）用1ml 1mM米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM米唑），十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色5）将显色的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。6）4C冰箱保存。

原位杂交实验服务内容：①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；

②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、巨细胞病毒DNA的检测；

③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；

④基因在染色体上的定位；

⑤检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等；

⑥分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。

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