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实时PCR实验

简要描述:实时PCR实验(real-time PCR),属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相对定量。可检测mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷贝数变化。

  • 更新时间:2021-11-12
  • 浏览次数:146

详细介绍

实时PCR实验具体方法

1.SYBRGreen法:

在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

SYBR定量PCR扩增荧光曲线图

PCR产物熔解曲线图(单一峰图表明PCR扩增产物的单一性)

2.TaqMan探针法:

探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

二、服务流程

1、引物设计与合成
2、DNA/RNA抽提
3、反转录(针对RNA)
4、上机定量分析
三、客户提供
1、全血、组织或细胞。
2、引物,或由丰核提供。
3、基因信息:目的基因名称、物种和序列(或GenBank Accession Number)。
四、交付内容
实验报告:详细操作步骤
原始数据:溶解曲线图,扩增曲线图,ct值

实时PCR实验服务列表

项目

备注

周期

引物设计与合成

 

3个工作日

提取

RNA提取、miRNA提取、DNA提取

2个工作日

反转录

 

2个工作日

qPCR反应

SYBR Green方法,相对定量

2个工作日

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