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细胞形态观察技术服务

简要描述:细胞形态观察技术服务是达为科生物的基础服务项目之一,由细胞平台经验丰富的实验人员操作完成。

  • 更新时间:2021-11-12
  • 浏览次数:208

详细介绍

(一)倒置显微镜下直接观察细胞形态

细胞形态变化包括:细胞核、细胞膜和细胞质的改变,即细胞是否有空泡积累和脂质小滴、是否可见细胞膜膨出(鼓泡)、细胞核染色质的变化以及细胞器如线粒体、溶酶体等的变化、细胞脱壁和贴壁、细胞膜表面是否毛糙无光泽、细胞是否裂解为碎片等。通过细胞形态的这些变化,可直观快速地判断细胞毒性。

(二)透射电子显微镜观察

【材料】

1. 2%~3%琼脂糖。

2. 2%~2.5%戊二醛。

3. 1%四氧化*。

4. 0.2M PBS缓冲液。

5.梯度丙酮。分别为50%,70%,90%,100%浓度的丙酮。

【方法】

1.收集对数生长期的培养细胞5x107左右。将细胞连同培养液放入2ml的离心管中,然后用PBS清洗2~3次,1000~1500r/min离心样品5~10分钟,吸去上清液,混匀细胞。

2.沿管壁小心加入2%~2.5%的冷戊二醛,轻轻吹打,使细胞混匀。在4℃的环境中固定30分钟,然后用指弹法将细胞团块弹散,继续用新的固定液固定细胞30分钟。1000r/min离心5分钟,弃上清液。

3.在4℃下用PBS冲洗后放置1~2小时或者过夜,离心后弃上清液。

4.管内加入0.1~0.5m1 37℃的2%~4%的琼脂糖液,混匀并冷却,形成细胞琼脂凝胶预包埋块。

5.离心管中加入少量的PBS或者75%的乙醇,用铝片沿管壁小心地将细胞琼脂糖松动,预包埋块移到含有75%乙醇的青霉素瓶中,一天后换固定液一次。4℃保存。

6.将预包埋块切成1 mm3大小,放到1%四氧化*中4℃固定1~ 2小时。用PBS反复漂洗后放置30分钟或过夜。

7.分别用50%,70%,90%,100%的丙酮脱水一次,每次10~15分钟;然后100%丙酮脱水3次,每次30分钟。

8.浸入稀释包埋剂(丙酮:包埋剂=1:1)中,室温1小时。再放到纯包埋剂中,37℃过夜。然后60℃固定48小时。放置于干燥器中备用。

9.将样品放到电子显微镜进行透视观察。

(三)扫描电子显微镜观察

培养细胞电镜扫描观察非常方便;在观察铁壁细胞时也需要进行消化,制备成细胞悬液后,用Hanks液漂洗1到2次后,除去细胞碎块和血清蛋白,以防妨碍观察。

【材料】

1. 1.5%戊二醛。

2. 0.2M PBS缓冲液。

3. 50%,70%,90%,95%,100%的梯度乙醇。

4. 1%四氧化*(Os04)。

5.丙酮。

【方法】

1.单层细胞盖玻片培养物冷漂洗后,用1.5%戊二醛4℃固定1~2小时。PBS液清洗3次,每次10分钟。

2.在4℃下用1 % OSO4固定1小时,然后用PBS缓冲液清洗3次,每次10分钟。

3.分别用50%,70%,90%,95%,100%的乙醇依次脱水,每个浓度的乙醇脱水2次,每次15分钟。

4. 100%丙酮脱水3次,每次30分钟。

5.将标本在4℃下用丙酮保存。

6.用扫描电子显微镜观察。

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