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实时荧光定量PCR实验

简要描述:实时荧光定量PCR实验 (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

  • 更新时间:2021-11-12
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详细介绍


所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图(单一峰图表明PCR扩增产物的单一性)
2.TaqMan探针法:
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。
服务流程
1.客户认真写好订单,提供待检基因相关信息;
2.签订技术服务合同,支付预付款(30-50%);
3.设计合成定量PCR引物(或客户提供文献引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录;
5.PCR预实验,主要检测引物的特异性和扩增效率;
6.正式定量实验:对所有样品上机检测;
7.实验结果和数据分析,形成报告。
 

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