详细介绍
Elisa检测技术实验步骤
ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种常用的免疫分析技术,用于检测抗原或抗体的存在和浓度。以下是进行Elisa检测的基本步骤:
1.准备材料和试剂:确保所有必需的试剂和材料都已准备就绪,包括酶标抗体、固相载体(如微孔板)、洗涤液、底物和终止液。
2.包被微孔板:将特定的抗体或抗原固定在微孔板的孔内,通常通过在孔中加入包被缓冲液和目标蛋白进行过夜孵育实现。
3.封闭非特异位点:使用封闭液(如BSA或脱脂牛奶)处理微孔板,以减少非特异性结合。
4.添加样本和标准品:向微孔板中加入待测样本和一系列已知浓度的标准品,进行孵育以允许抗原或抗体与其对应的结合伴侣结合。
5.添加酶标抗体:加入与目标抗原或抗体特异性结合的酶标抗体,并孵育以形成酶标记的免疫复合物。
6.洗涤:使用洗涤液去除未结合的酶标抗体,这是减少背景信号和提高检测灵敏度的关键步骤。
7.添加底物:加入酶底物,底物在酶的作用下发生颜色反应。
8.终止反应:加入终止液停止颜色反应的发展。
9.读取吸光度:使用酶标仪在特定波长(通常是450 nm)下测量各孔的吸光度,根据标准曲线计算样本中目标分子的浓度。
10.数据分析:根据标准曲线绘制样本的浓度,并进行必要的统计分析。
在进行 Elisa检测技术实验时,应严格遵守实验操作规程,确保实验的准确性和重复性。实验中的每个步骤都可能影响最终结果,因此需要仔细控制实验条件,如温度、
孵育时间和洗涤次数.
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