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裸鼠皮下成瘤模型构建的基本步骤和技术要点
裸鼠皮下成瘤模型(Cell Derived Xenograft, CDX模型)的构建是一种常用的肿瘤模型,它涉及将体外培养的肿瘤细胞注射到裸鼠的皮下组织中,以模拟肿瘤的生长
和扩散。
以下是构建裸鼠皮下成瘤模型的关键步骤和技术要点:
1.动物选择:通常选择4-6周龄的Nude裸鼠,并在特殊病原体自由(SPF)环境中适应至少一周。
2.细胞准备:选择适合的肿瘤细胞株,并在接种前将细胞培养至对数生长期,细胞密度达到80%-90%左右。使用0.25%yimei消化细胞,并用无血清培养基洗涤和计
数,调整细胞悬液至适宜的接种浓度,通常为5×10^6个细胞/200μL。
3.接种步骤:在接种前,用75%酒精对裸鼠的注射部位进行消毒。使用1ml注射器进行皮下注射,注射深度约1cm。注射时应缓慢推进针头,并在注射完毕后缓慢
退出针头,以避免细胞悬液泄漏。
4.成瘤监测:注射后通常在3天内开始肉眼观察,并定期记录裸鼠的体重和肿瘤的大小。肿瘤体积的计算公式为V = (长轴 × 短轴^2) / 2。
5.注意事项:确保细胞活性,接种时细胞应保持在低温下。注射后应密切观察裸鼠的健康状况,以评估肿瘤的生长和药物治疗的效果。如果在预定时间内未见肿瘤
形成,可能需要检查细胞活力、动物健康状况或接种技术。
优化裸鼠皮下成瘤模型构建的技巧和建议
1.选择健康状态良好的裸鼠进行实验,以提高成瘤率。
2.确保使用新鲜、活力高的肿瘤细胞进行接种。
3.接种操作应迅速而准确,以减少细胞暴露在非理想环境中的时间。
4.监控和维护适宜的饲养环境,以支持裸鼠和肿瘤的生长。
5.对于难以成瘤的细胞株,可以考虑使用其他免疫缺陷小鼠品系,如NOD-SCID或NOG小鼠。
通过遵循上述步骤和注意事项,可以有效地构建裸鼠皮下成瘤模型,用于肿瘤生物学研究和药物测试。
参考:
[1]贾罗琦王超程明军孙建, 裸大鼠人乳腺癌皮下移植瘤模型的建立和评价. 学报(医学版), 2014. 41(05): 第685-689页.
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