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成年小鼠关节软骨细胞原代培养

简要描述:成年小鼠关节软骨细胞原代培养:传统培养方法体外培养的软骨细胞经长时间传代培养后往往去分化为成纤维细胞,导致细胞数量及活性下降.如何避免培养过程中的去分化问题,是模拟体内软骨内成骨软骨发育过程的关键.

  • 更新时间:2024-03-22
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详细介绍

成年小鼠关节软骨细胞原代培养


  1. C57小鼠,8-10周,通过颈椎脱位处死浸入75%乙醇浸泡5分钟,转移到通风柜中的解剖盘中。

  2. 使用眼科剪和镊子,使髋关节脱臼,保持股骨头完整

  3. 用止血qian去除每个股骨头的软骨帽,将组织放入含2%双抗的PBS中。

  4. 用冰冷的含2%双抗的PBS清洗2-3遍,将关节软骨小心移到2ml离心管中。

  5. 用眼科剪dao将软骨帽剪成约1mm3的碎片,加入3ml预热的Collagenase D1.5mg/ml)。

  6. 放入37℃、80rpm的摇床中进行第一次消化,时间2h

  7. 第一次消化结束后,加入含血清的培养基终止消化,40um的细胞筛过滤后,离心1500rpm2min

  8. 沉淀用DMEM完quan培养基重悬,计数,种植在24孔板中。

  9. 在未消化的组织中加入3ml预热的Collagenase D,放入37℃、80rpm的摇床中进行第二次消化,时间2h,然后收集细胞。


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