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慢病毒转染是利用改造后的慢病毒载体将外源基因递送至靶细胞，实现长期稳定表达的基因导入技术。其核心优势包括：
广谱细胞适用性：可感染分裂细胞与非分裂细胞（如神经元、干细胞、原代细胞），突破传统转染限制 。
高效整合表达：病毒RNA经逆转录为DNA后整合至宿主基因组，实现外源基因的yong久性表达 。
低免疫原性：删除病毒致病基因（如HIV的 tat、rev），显著降低宿主免疫反应 。
操作便捷性：无需复杂转染试剂，通过病毒颗粒直接感染细胞 。
术语辨析：
转染（Transfection） ：通常指非病毒介导的核酸导入（如电穿孔、脂质体）。
转导（Transduction） ：特指病毒介导的基因传递，慢病毒技术属于此类 。
| 组分 | 功能 | 技术演进 |
|---|---|---|
| 转移质粒 | 携带外源基因（如cDNA、shRNA）及包装信号（Ψ） | 第三代载体删除 tat，改用CMV启动子驱动转录 |
| 包装质粒 | 表达病毒结构蛋白（Gag、Pol） | 分割为gag/pol与rev两质粒，降低重组风险 |
| 包膜蛋白质粒 | 表达VSV-G蛋白（水疱性口炎病毒G蛋白），决定宿主范围 | 替代HIV天然包膜，扩大感染细胞类型 |
| 辅助质粒 | 提供Rev蛋白，促进未剪接RNA出核 | 增强病毒产量 |
病毒进入：VSV-G蛋白结合靶细胞膜受体（如LDLR），介导膜融合 。
逆转录与入核：病毒RNA在胞质逆转录为cDNA，经整合前复合体（PIC）转运至核内 。
基因组整合：病毒整合酶（Integrase）将cDNA随机插入宿主染色体，实现yong久性表达 。
| 步骤 | 操作要点 | 质控标准 |
|---|---|---|
| 质粒共转染 | 四质粒系统（转移+包装+包膜+辅助）转染293T细胞，48-72小时收集上清 | 质粒纯度＞1.8（A260/A280），无内毒素 |
| 病毒浓缩 | 超速离心（50,000×g）或PEG沉淀法，提高滴度10-100倍 | 浓缩后滴度＞1×10⁸ IFU/mL |
| 滴度测定 | 流式细胞术（荧光报告基因）或qPCR（病毒基因组拷贝数） | 功能性滴度（TU/mL）＞10⁷为合格 |
感染条件优化：
添加聚凝胺（Polybrene，8μg/mL）增强病毒吸附 。
感染复数（MOI）测试：通常MOI=5-20（根据细胞类型调整） 。
稳定株筛选：
抗生素筛选：嘌呤霉素（1μg/mL）处理7-14天，清除未转染细胞 。
单克隆扩增：有限稀释法获得均一性细胞株 。
关键技巧：
非分裂细胞（如神经元）需延长感染时间至72小时 。
原代细胞建议使用低MOI（≤5）避免毒性 。
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